[发明专利]抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞及其抗肿瘤的应用

说明书

技术领域

本发明提供了一种抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞，及其在抗肿瘤中的应用。

背景技术

嵌合抗原受体（Chimeric Antigen Receptor，CAR）修饰的T（CAR-T）细胞疗法是一种很有前途的癌症治疗方法。CAR-T细胞消灭癌细胞通过识别表达在肿瘤表面的肿瘤相关抗原（Tumor-Associated Antigens，TAA）。许多临床前和早期临床试验用CAR-T细胞的功效来治疗癌症患者的造血系统恶性肿瘤和实体瘤获得成功。不过，也有一些不足，限制了CAT-T细胞的临床广泛应用。首先，CAR的单链抗体需要针对每个肿瘤抗原，因为没有普遍通用的表达于所有类型癌细胞表面的抗原。如果设计每一个肿瘤特异性CAR-T细胞来治疗每一种癌症患者，会耗费大量的人力物力，且成本昂贵。其次，肿瘤抗原表达下调或突变会导致肿瘤逃避CAR-T细胞治疗。第三，目前临床前和早期临床试验的第二代与第三代CAR-T细胞会针对某些少量表达肿瘤相关抗原的正常组织产生超强的反应，呈“瀑布”式过量增加，造成对正常组织的过激免疫反应。因此，有必要对CAR自身的工作体系进行改造，提高CAR介导的肿瘤过继细胞治疗（adoptive cell therapy，ACT）的临床安全性。

因此，一个通用的嵌合抗原受体能识别多种肿瘤抗原的CAR-T细胞的产生发展是有效的T细胞免疫疗法的产业化重要一步。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于免疫治疗的通用的、适应性强的抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞及其抗肿瘤的应用。

DOTA化合物能偶联到不同肿瘤细胞特异性抗体（Tumor specific Antibody，TSA）或肿瘤细胞特异性配体上。抗DOTA抗体修饰的CAR-T细胞能识别TSA-DOTA，因此抗DOTA-CAR体统了一种通用的CAR-T系统，用于靶向多种癌症。

1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（1,4,7,10-tetraazacyclododecane-

1,4,7,10-tetraacetic acid，DOTA），是一种金属螯合剂，能标记放射性核素，也可与肽、单链抗体形成共价键，可以用于来跟踪并定位肿瘤。放射性标记的SMT-487（(90) Y]-DOTA-D-Tyr3-奥曲肽）可用于治疗难治性小细胞肺癌或转移性乳腺癌。68Ga-DOTA-Tyr3-奥曲肽PET在神经内分泌肿瘤：与生长抑素受体显像和CT比较。DOTA已经用于缀合抗体系列研究，以抗CEA/抗DOTA双特异性抗体形式的用于肿瘤摄取和血液清除。抗DOTA抗体已被报道（原子核医学生物学，2011年2月，38（2）：223-233）能与具有高亲和力的DOTA结合，该抗体与皮摩尔（pmol）级的放射免疫治疗和成像的DOTA螯合物具有亲和力。抗DOTA单链抗体可变（抗体）构建表达于T细胞的嵌合抗原受体的DOTA-CAR-T细胞会认识肿瘤特异性抗体缀合的DOTA分子，发挥肿瘤杀伤功能。

本发明提供了一种抗DOTA嵌合抗原受体，其特征在于，抗-DOTA抗体轻链可变结构域（VL）和重链可变结构域（VH）形成胞外域，前导序列是CD8α链信号肽，DOTA单链抗体被连接到一个CD8的铰链上，和CD8跨膜结构域（CD8 TM）连接，其后连接有共刺激分子CD137（4-1BB）的激活结构域和免疫受体酪氨酸活化基序肽CD3ζ结构域。

所述抗DOTA嵌合抗原受体可以由重组慢病毒介导表达。

可选择地，所述的重组病毒载体为pLVX-IRES-GFP载体。

所述重组慢病毒介导表达的抗DOTA嵌合抗原受体用于制备抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞。

所述的抗DOTA嵌合抗原受体在制备T细胞免疫疗制剂中的应用，其特征是：包括：1）用一种肿瘤特异性抗体偶联的DOTA分子TSA-DOTA定位癌症患者的肿瘤细胞；2）用抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞CAR-T细胞表面抗-DOTA抗体识别上述TSA-DOTA，从而激活CAR-T细胞来杀死癌细胞。

所述的抗DOTA嵌合抗原受体在制备T细胞免疫疗制剂中的应用，其特征是：包括：1）用一种肿瘤特异性配体偶联的DOTA分子TSA-DOTA定位癌症患者的肿瘤细胞；2）用抗DOTA嵌合抗原受体修饰的T细胞CAR-T细胞表面抗-DOTA抗体识别上述TSA-DOTA，从而激活CAR-T细胞来杀死癌细胞。