[发明专利]一种华支睾吸虫特异性PPMP型抗原

说明书

本申请是申请号为“2010101786846”、申请日为“2010年05月19日”、发明名称为“华支睾吸虫特异性PPMP型抗原及其应用”的分案申请。

技术领域：

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种华支睾吸虫，具体来说是三种华支睾吸虫的特异性抗原PPMP型抗原及其应用。

背景技术：

华支睾吸虫病（Clonorchiasis sinensis）是由华支睾吸虫［Clonorchis sinensis,Cs］感染所引起的人兽共患病。该病主要分布于亚洲，如中国、日本、韩国（为韩国主要人体寄生虫）、朝鲜、越南、东南亚等国家。估计全球有3500万人感染。在我国，除新疆、内蒙古、甘肃、青海、西藏、宁夏等省、自治区未见报道外，其余25个省、市、自治区以及台湾省和香港特别行政区都已有该病的流行报道或病例报告。由于移民的流动，以及日益频繁的全球范围的旅游和经济活动，在一些非流行区和发达国家（包括北美和西欧）该病的病例报告也越来越多。

根据卫生部于2001年6月～2004年底在全国（除台湾、香港、澳门外）进行的人体重要寄生虫病现状调查结果显示，华支睾吸虫感染率比1990年全国寄生虫病分布调查的结果上升了75%，其中广东、广西、吉林3省（区）分别上升了182%、164%和630%。估计目前全国华支睾吸虫感染者达1200多万人。华支睾吸虫病是我国少数个别几个呈现上升趋势的寄生虫病之一，该病的防治工作已迫在眉睫。

在我国南方（如广东、广西）及部分北方地区（如东北3省的朝鲜族居住区），当地人群有吃生的或未煮熟的淡水鱼肉的习惯，鱼肉中活的囊蚴被摄入人体，引起人的感染。这些地区居民虽知吃“鱼生”会感染本病，但饮食习惯一时难以改变。而且随着生活水平的提高，以往不吃或很少吃“鱼生”的人群也开始吃“鱼生”，现在生鱼片的风味吃法在非流行区，特别是大中城市也很盛行。同时由于市场开放，流行区含华支睾吸虫囊蚴的鱼运往各地，因此城镇居民感染华支睾吸虫的人数有增加的趋势。

华支睾吸虫成虫寄生于人或其它终宿主的肝胆管内，虫体的分泌/代谢产物及虫体本身的机械刺激，可引起胆管，特别是引起次级胆管的炎症反应，中度感染胆管可出现局限性扩张，胆管上皮增生、管壁增厚、管腔狭窄，如合并细菌感染，可引起胆管炎和胆管肝炎，周围纤维组织增生，晚期可发生肝硬化。有证据表明，华支睾吸虫感染可增加患者患胆管癌（CLG）的风险，华支睾吸虫感染相关性肝胆管肿瘤是华支睾吸虫病流行区一个重要的公共卫生问题。

为了快速诊断、及时治疗和有效控制华支睾吸虫病，需要特异、灵敏、简便的方法检测人群中华支睾吸虫的感染。

对于华支睾吸虫病人的诊断，传统的粪便检查仍是目前确诊华支睾吸虫病的主要方法。但由于患者依从性较差，且华支睾吸虫虫卵较小易于漏检，该方法有一定的缺陷。

目前在现场防治工作中较广泛地应用了免疫诊断方法（主要是ELISA法）。但是仍存在一些问题：对健康人有不同程度的假阳性,对华支睾吸虫病人有一定的假阴性，对其它寄生虫（血吸虫、并殖吸虫）感染也有一定的交叉反应。Yong TS应用ELISA方法检测48例华支睾吸虫病人血清抗体，只有75%的阳性反应，但在28例正常对照和16例并殖吸虫病例中，分别出现了7.1%和37.5%的假阳性。

已有研究资料表明一些寄生虫的排泄分泌抗原（ESA）或重组的ESA可应用于寄生虫病的血清学诊断。Kim SI用ESA来检测活动性华支睾吸虫病病人血清相应抗体动态反应，发现30kDa和7kDa区带与患者血清呈强阳性反应，而与吡喹酮治疗6个月后的病人血清反应较弱，其中7kDa区带未见与卫氏并殖吸虫病、横川后殖吸虫病、华支睾吸虫病患者痊愈后的血清起交叉反应，特异性比30kDa区带更强，据此认为7kDa抗原可作为活动性华支睾吸虫病的标志性诊断抗原。Min-Ho CHOI对华支睾吸虫的排泄分泌抗原（ESA）检测抗体的ELISA法和成虫粗抗原（CA）检测抗体的ELISA法的诊断价值进行了比较和评估。ESA检测抗体的ELISA法的特异性显著高于用CA检测抗体的ELISA法（前者特异性为93.1%，后者为87.8%），表明ESA用于检测华支睾吸虫患者血清抗体优于粗抗原。因此，与华支睾吸虫的CA相比，ESA作为华支睾吸虫病的诊断抗原具有更高的特异性和敏感性。然而传统的虫源性抗原制备复杂，质量可控性较低，制备量有限，难以适应大规模查病的需求。