[发明专利]治疗恶性肿瘤的甘露糖化壳聚糖与唑来磷酸复合物纳米颗粒药物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗恶性肿瘤的甘露糖化壳聚糖与唑来磷酸复合物纳米颗粒药物的制备方法。 

背景技术

目前，恶性肿瘤的治疗效果不佳。医学、生物学、材料学等等各专业领域，均在开发各种治疗新药，以期提高治疗效果。纳米材料的开发是其中一个方面，近年来，壳聚糖由于其无毒、生物可降解和生物相容性,在作为基因以及药物载体上备受关注。它作为自然界中唯一带正电的直链多糖，能作为负电荷物质的吸附核心，形成纳米级微粒，进而实现其药物负载功能。通常使用离子交联法，即：壳聚糖上的氨基阳离子与三聚磷酸钠的磷酸基阴离子通过静电吸引进行分子内或分子间交联，而形成纳米颗粒；并在离子交联过程中加入抗肿瘤药物而形成负载药物的纳米颗粒，在体内随着壳聚糖与三聚磷酸钠交联物的降解，负载的抗肿瘤药物释放而发生良好的缓释抗肿瘤作用。 

但这种具有缓释作用的抗肿瘤纳米颗粒存在如下几个问题：1、壳聚糖与三聚磷酸钠交联物纳米材料对肿瘤的靶向性差，纳米粒在体内不能较好的到达肿瘤部位发挥作用；2、纳米粒需要另外携带治疗药物（如化学药品）才能发挥抗肿瘤治疗效果，纳米粒负载的药物量有限、包封率低，药物中抗肿瘤活性成分含量低，疗效差；3、纳米粒负载的抗癌药物在实际应用的各个环节（如体外溶解、体内循环）会有不断脱落丢失的情况，使得纳米粒的实际治疗效果进一步下降。 

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗恶性肿瘤的甘露糖化壳聚糖与唑来磷酸复合物纳米颗粒药物的制备方法，该法的制备流程简单、药物成本低，制得的纳米颗粒药物对恶性肿瘤具有良好的靶向性、活性成分含量高、疗效高，病人服药的顺从性好。 

本发明实现其发明目的所采用的技术方案为，一种治疗恶性肿瘤的甘露糖 化壳聚糖与唑来磷酸复合物纳米颗粒药物的制备方法，其步骤是： 

A、将甘露糖化壳聚糖5～25g溶于10L蒸馏水中，再加入50～200mL冰乙酸，并以300-500转/分的速度，搅拌12小时；然后滴入氢氧化钠溶液将溶液的PH值调至3.5～5.5，最后在0.45um的过滤器中过滤，得到甘露糖化壳聚糖溶液； 

B、将唑来磷酸溶于蒸馏水中配制成浓度为0.5～4.5g/L的唑来磷酸溶液，再滴加氢氧化钠溶液将唑来磷酸溶液的PH值调至7.2-7.6； 

C、将A步得到的甘露糖化壳聚糖溶液,以200-400转/分的速度进行搅拌,在搅拌的过程中，滴入B步的唑来磷酸溶液；滴入的唑来磷酸与甘露糖化壳聚糖的质量比为1:3～12，滴完后继续搅拌15～30分钟；然后将反应液放入透析袋，透析袋在蒸馏水中以100转/分的速度进行搅拌透析；每隔4小时换一次蒸馏水，透析48小时后，取出透析袋中的液体，在-80℃的温度下冷冻真空干燥，即得。 

本发明方法的机理为： 

甘露糖化壳聚糖分子中含有大量的-NH₂，甘露糖化壳聚糖在酸性溶液中质子化形成带正电的氨基（-NH₃⁺），并溶解。唑来膦酸分子上有多个羟基（-OH），碱化后形成负电基团（-O^-），与壳聚糖分子内大量的正电基团（-NH₃⁺）形成交联，使唑来膦酸分子被甘露糖化壳聚糖分子包裹形成纳米粒。该纳米粒抗可能的肿瘤机理为：肿瘤细胞及其周围的肿瘤相关性巨噬细胞（TAM）大量表达甘露糖受体，纳米粒药物表面的甘露糖结合到甘露糖受体上，实现纳米粒药物的靶向性。随后，肿瘤及巨噬细胞内吞纳米粒，纳米粒表面包裹的甘露糖化壳聚糖分子膜降解释放出内部的唑来膦酸，唑来膦酸诱导肿瘤及巨噬细胞凋亡，从而杀灭肿瘤细胞及肿瘤相关性巨噬细胞，破坏了肿瘤细胞赖以生存的微环境，起到控制肿瘤的作用。 

与现有技术相比，本发明的有益效果是： 

一、与现有的通过壳聚糖与三聚磷酸钠交联制备纳米颗粒，再在交联过程中负载药物发挥抗肿瘤治疗作用相比，本发明直接采用甘露糖化壳聚糖与唑来膦酸进行离子交联直接制得纳米药物颗粒，该纳米药物颗粒的交联成分（唑来膦酸）本身即可发挥抗肿瘤，不用再另外负载药物，从而简化了制备流程，降 低了药物成本；制得的纳米药物颗粒径的活性成分含量高，疗效高，病人服药的顺从性好。