[发明专利]一种低致死率的叶蝉微量注射方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种低致死率的叶蝉微量注射方法，属于昆虫生理生化研究领域。

背景技术

叶蝉为一类害禾谷类、蔬菜、果树和林木等的昆虫。同翅目，叶蝉科。体长3-15毫米。该科昆虫不仅危害农作物，而且还传播植物病毒病。研究叶蝉的生理生化特点，有利于揭示昆虫与农作物之间的关系，为昆虫防治提供依据。

昆虫的微量注射是指借助仪器，将微量液体状试剂注入昆虫内，是昆虫生理学研究的重要方法，是昆虫生理生化实验中最重要的技术之一。但是该方法会造成昆虫躯体的机械损伤，严重时会导致虫体死亡，因此对仪器和技术的要求较高，注射针口径、材质，昆虫的龄期和注射位点，注射试剂和剂量，以及注射角度、时间和液体流速等因素都可影响昆虫的存活率。目前微量注射仪主要有产生液压的油泵、产生气压的空气压力泵等，注射体积范围从皮升到纳升。虽然仪器越精细，对昆虫造成的伤害可能越小，但是微量注射对操作和材料要求还是比较高，如1）注射针拉制后的口径，口径越大，造成的伤口越大；2）昆虫龄期，虫体较大的昆虫在注射后，伤口易愈合，存活率较高，但虫体小的昆虫，存活率低下；3）注射位点，多为腹部的节间膜，角度也视操作人员经验而定。因此影响该技术的因素有人为的和材料本身的，但其最终目的都是尽可能降低对昆虫的伤害，保证昆虫的存活率，以便后续实验的良好开展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低致死率的叶蝉微量注射方法，提高注射效率，减少人力和时间的消耗。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种低致死率的叶蝉微量注射方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）使用垂直拉针仪拉制毛细管玻璃注射针，并在显微镜下检查针头，保证烧熔的玻璃不堵塞针头；

2）将叶蝉收集在试管内，冰上麻痹5-7分钟，将微量上样针前端的细管剪下，用于挑取注射后的叶蝉；同时压扁剩余的小段细管头部，用于入针时顶住叶蝉；

3）给玻璃注射针上样，保证针头接触液体后可立刻出液，而后，调整注射针管角度为30-40°；

4）将麻痹后的叶蝉移至显微镜下，腹部朝上，移动针头，将针尖对准后胸与第一腹节之间的节间膜正中位置；用压扁后的微量上样针细管头顶住叶蝉头部，防止入针时推动虫体，然后小心入针，待针尖刺入虫体后，调整显微操作仪的油压泵以控制注射剂量，最小注射剂量为2纳升，最大注射剂量为0.2微升，然后把叶蝉轻轻拨离针头，并蘸水粘附叶蝉，小心移入小型饲养笼；

5）待叶蝉苏醒后，移入养虫室常规饲养。

    所述的微量上样针为microloader微量上样针。

所述注射剂量为为2纳升-0.2微升，而不致死。

所述步骤4）中用针叶期的水稻苗或者微量上样针剪下的细管把叶蝉轻轻拨离针头。

本发明的优点在于：注射位点容易入针，注射角度对虫体损伤较小，注射剂量达到最大仍可保持较高存活率，减少人力和时间的消耗。

具体实施方式

材料：水稻苗，小型饲养笼，冰，试管，毛细管玻璃注射针(内径90mm)，microloader微量上样针（eppendoff）

仪器：eppendoff 显微操作仪injectman NK2，NARISHIGE垂直拉针仪 PC-10,体视显微镜。

实施例1

使用NARISHIGE垂直拉针仪拉制毛细管玻璃注射针，并在体视显微镜下检查针头，保证烧熔的玻璃不堵塞针头。

将2龄的叶蝉收集在试管内，冰上麻痹5分钟。将microloader微量上样针前端的细管剪下，用于挑取注射后的叶蝉；同时压扁剩余的小段细管头部，用于入针时顶住叶蝉。

给玻璃注射针上样，保证针头接触液体后可立刻出液。而后，调整显微操作仪针管角度，30°。

将麻痹后的叶蝉移至体视显微镜下，腹部朝上，移动针头，将针尖对准后胸与第一腹节之间的节间膜正中位置。用压扁后的microloader微量上样针细管头顶住叶蝉头部，防止入针时推动虫体，然后小心入针。待针尖刺入虫体后，调整显微操作仪的油压泵以控制注射剂量0.15微升（剂量大时，可见虫体逐渐胀大），用microloader微量上样针剪下的细管把叶蝉轻轻拨离针头，并蘸水粘附叶蝉，小心移入小型饲养笼。

待叶蝉苏醒后，移入养虫室常规饲养。

实施例2