[发明专利]高解析度分析核酸以检测序列变异的系统和方法

权利要求书

1.一种核酸序列扩增的动态波动方法，该方法包括：

a.将一对正向和反向寡核苷酸引物与待扩增的靶核酸序列结合；和

b.通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在15℃的温度范围以内热循环来扩增所述靶核酸序列，所述温度范围通过所述寡核苷酸引物对的退火曲线(TA)和靶核酸序列的变性曲线(TD)的重叠内所包括的面积限定；

其中所述各正向和反向寡核苷酸引物的熔解温度(Tm)在靶核酸序列的熔解温度的15℃以内，且其中热循环包括：

i.使靶核酸序列变性；和

ii.所述正向和反向寡核苷酸引物退火；和

iii.通过所述正向和反向寡核苷酸引物使靶核酸序列延伸。

2.权利要求1的动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在10℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

3.权利要求1的动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在5℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

4.权利要求1的动态波动方法，通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在2.5℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

5.权利要求1的动态波动方法，其中所述正向和反向寡核苷酸引物的每一个以大约等摩尔浓度存在。

6.一种核酸序列扩增的实时动态波动方法，该方法包括：

a.将一对正向和反向寡核苷酸引物与待扩增的靶核酸序列结合；和

b.通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在15℃的温度范围以内热循环来扩增靶核酸序列，所述温度范围通过所述寡核苷酸引物对的退火曲线(TA)和靶核酸序列的变性曲线(TD)的重叠内所包括的面积限定；

其中所述各正向和反向寡核苷酸引物的熔解温度(Tm)在靶核酸序列的熔解温度的15℃以内，且其中热循环包括：

i.使所述靶核酸序列变性；和

ii.所述正向和反向寡核苷酸引物退火；和

iii.通过所述正向和反向寡核苷酸引物使靶核酸序列延伸，

c.在所述扩增步骤中同时检测所扩增的靶核酸序列。

7.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述检测通过监测荧光进行。

8.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述检测通过监测插入双链DNA的荧光染料的荧光进行。

9.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述检测通过监测用荧光报道基因标记的序列特异性寡核苷酸探针的荧光进行。

10.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在10℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

11.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在5℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

12.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在2.5℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

13.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中通过使所述正向和反向寡核苷酸引物对和靶核酸序列在所述靶核酸序列的熔解温度附近的2.5-10℃的温度范围内进行热循环来扩增靶核酸序列。

14.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述寡核苷酸引物对之一与靶核酸序列的熔解温度范围差异比所述寡核苷酸引物对的第二个更大。

15.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述寡核苷酸引物之一的熔解温度与靶核酸序列的熔解温度相同。

16.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述寡核苷酸引物中至少一个的熔解温度在靶核酸序列的熔解温度的10℃以内。

17.权利要求6的核酸序列扩增的实时动态波动方法，其中所述寡核苷酸引物中至少一个的熔解温度在靶核酸序列的熔解温度的5℃以内。