[发明专利]用于骨髓活检的固定-脱钙液及骨髓活检组织石蜡切片方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于骨髓活检的固定-脱钙液及骨髓活检组织石蜡切片方法。

背景技术

骨髓活体组织检查术简称骨髓活检，就是用一个特制的穿刺针取一小块大约1.0-2.0厘米长的圆柱形骨髓组织来作病理学检查。操作方法与骨髓涂片穿刺术完全相同，骨髓活检保持了完整的骨髓组织结构，能很好地反映骨髓增生程度，比较全面地了解骨髓病态特点，尤其是髓外肿瘤的骨髓浸润。

现在常采用石蜡切片技术制作骨髓活检组织，主要包括以下步骤：骨髓样本组织的固定、脱钙、脱水、包埋、切片、HE染色及按疾病诊断需要进行免疫组织化学染色。影响骨髓石蜡切片的质量是多方面的，其中骨髓组织的固定、脱钙、染色等关键环节处理不当，均可影响切片的质量，从而影响医生对病理学诊断结果地判断。

制作高质量的骨髓切片最重要的环节是标本组织的固定和脱钙。如果骨髓标本组织未被充分固定，那么在后续的环节中标本组织形态结构及细胞内各种成分就会被破坏。如果标本组织脱钙不完全，将无法切出完整的石蜡切片，且在染色过程中容易掉片，容易人为地造成组织结构不完整。

现在常用的骨髓标本固定液有10%的中性福尔马林、Bouin液或LowyFMA液。常用的脱钙液有无机酸或EDTA等温和脱钙液。使用10%的中性福尔马林固定的时间为16-24小时，因为如果固定时间太短，可能导致不均匀的免疫反应，陈旧组织较容易产生色素沉淀。Bouin液包含具有强烈刺激性气味的冰醋酸，检验员在使用这类固定液时，呼吸系统会受到强烈地刺激。LowyFMA液中包含属于易爆试剂的苦味酸，操作时要非常小心，使用这类固定液存在一定的安全隐患。使用Bouin液和LowyFMA液固定标本组织，作用时间也需16-24小时。

现在常用的脱钙液有两类：一种是无机酸，这类脱钙液的脱钙速度较快，一般骨髓活检组织脱钙2小时即可，但可能会导致许多抗原的丢失，对免疫组织化学染色有明显影响。另一种为温和脱钙液，如EDTA等，但脱钙速度慢，需要过夜。 

在现有的骨髓活检石蜡切片方法中样本组织的固定和脱钙环节是分开两个步骤进行的，即先用固定液对骨髓标本固定，然后固定液更换成脱钙液完成样本脱钙。用固定液在室温条件下完成样本的固定需要16-24小时，用脱钙液完成样本的脱钙需要18-24小时。这样一来，整个固定和脱钙大约需要花费24-48小时。而这样长时间的骨髓样本切片制作过程，直接导致给出检测诊断结果的时间增加，影响治疗的及时性。再者，现有的切片方法中固定和脱钙是分开的两个步骤，且每个步骤都需要严格控制时间，一旦固定或脱钙的处理时间不准确就会直接影响到后续石蜡切片的效果，因此检验员必须在检验过程中腾出时间去更换工作液（从固定液更换为脱钙液），这样的工作量是很大的。

另一方面，为了促进健康服务业务，将人员、配备要求较高的检验业务项目交给第三方独立医学实验室已经成为趋势。这样将分散在各大医院的样本集中到独立医学实验室完成各种检验项目。医院收集病人的样本并转送到第三方独立医学实验室，转送时间少则1天，多则2-3天。现有的骨髓活检方法需要中途更换工作液，因此现有方法就不太适合采用第三方独立实验室来完成骨髓活检项目。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种用于骨髓活检的样本固定-脱钙液，包括40%的甲醛、EDTA和缓冲液，pH值为7.0-7.2。

进一步地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

进一步地，以1000ml计，包括：

0.1M 磷酸盐缓冲液         900ml；

40%的甲醛                 100ml；

EDTA                      150克；

pH值为7.0-7.2。

本发明还提供一种骨髓活检组织石蜡切片的方法，包括以下步骤：骨髓样本用固定-脱钙液进行固定和脱钙、流水冲洗、脱水、浸蜡、包埋、切片、 HE染色和/或免疫组织化学染色，其特征在于，所述的固定-脱钙液包括40%的甲醛、EDTA和缓冲液，pH值为7.0-7.2。

进一步地，以1000ml计，包括：

0.1M 磷酸盐缓冲液         900ml；

40%的甲醛                 100ml；

EDTA                      150克；

pH值为7.0-7.2。

进一步地，样本：固定-脱钙液的体积比等于或大于1：10。

进一步地，固定-脱钙的时间为20-72小时。