[发明专利]猪霍乱沙门氏菌酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒。 

背景技术

猪霍乱沙门氏菌（Shigella boydii）属于志贺氏菌C群，是一种重要的食源性致病菌，可通过受污染的肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品，瓜子仁等进入人体，引起发热、腹痛、里急后重，有时表现为全身中毒症状为中毒性痢疾，治疗不彻底转为慢性。 

目前猪霍乱沙门氏菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但国内外目前尚无可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以猪霍乱沙门氏菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及猪霍乱沙门氏菌快速检测产品。 

发明内容

本发明的目的是提供一种检测猪霍乱沙门氏菌的试剂盒。 

进而，本发明提供了一种用于检测猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒，所述的试剂盒含有： 

（a）固相载体，所述的固相载体上包被有作为捕捉抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体Mab05-F10，所述的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体Mab05-F10由小鼠杂交瘤细胞系Mab05-F10，CGMCC No.7712产生； 

（b）容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体Mab05-D10，所述的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体Mab05-D10由小鼠杂交瘤细胞系Mab05-D10，CGMCC No.7710产生。 

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。 

在另一优选例中，所述的检测抗体带有可检测的标记物。 

在另一优选例中，所述的可检测的标记物为辣根过氧化物酶。 

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有阳性对照和阴性对照。 

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的猪霍乱沙门氏菌菌液，所述的阴性对照为灭 菌的缓冲蛋白胨水。 

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。 

附图说明

图1本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图 

Lane1：Mab05-D10，Lane2：Mab05-F10 

具体实施方式

本发明人的研究表明，以猪霍乱沙门氏菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体，即Mab05-F10，保藏号CGMCC No.7712和Mab05-D10，保藏号CGMCC No.7710，上述两株单克隆抗体的抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与猪霍乱沙门氏菌结合。以上述单克隆抗体Mab05-F10包被酶标反应板作为捕捉抗体，用辣根过氧化物酶标记的上述单克隆抗体Mab05-D10作为检测抗体，制作酶联免疫检测试剂盒。结果显示，上述猪霍乱沙门氏菌检测试剂盒检测灵敏度达到10⁵cfu/ml，具有重复性、准确性好的优点，孔间误差小于5%，板内CV小于3%。其与单增李斯特、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、出血性大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等共计77种病原细菌均无交叉反应。 

在此基础上，本发明人进而根据双抗体夹心酶联免疫法，经过反复测试，终于获得了一种可快速、高效检测食源性猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒。 

抗体 

本发明包括两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体。本发明的两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体可以利用小鼠杂交瘤细胞系Mab05-F10（CGMCC No.7712）和小鼠杂交瘤细胞系Mab05-D10（CGMCC No.7710）分别分泌产生。