[发明专利]一种矽肺细胞模型的制备方法

权利要求书

1.一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：对培养至处于静止期的肺泡巨噬细胞使用矽尘刺激，24h后收集上清液，过滤除菌；在培养至处于静止期的肺腺癌细胞A549中加入矽尘及肺泡巨噬细胞上清液，于二者共同孵育肺上皮细胞，完成了矽肺细胞模型的建立。

2.如权利要求1所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：所述肺泡巨噬细胞上清液与肺腺癌细胞的体积比为1:1-3。

3.如权利要求2所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：所述肺泡巨噬细胞上清液与肺腺癌细胞的体积比为1:2。

4.如权利要求1所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：使用浓度为50ug/ml的矽尘刺激肺泡巨噬细胞。

5.如权利要求1或3所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：所述肺泡巨噬细胞用含体积浓度为20%胎牛血清的F12K培养液，呈悬浮生长，生长缓慢，每周传代1次，置于37℃及体积浓度为5%CO₂的培养箱中。

6.如权利要求5所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：收集对数生长期的肺泡巨噬细胞，细胞密度达80%-85%，离心，弃大部分旧培养液，用无血清培养液调整细胞密度为1×10⁶/ml，接种于24孔板内，每孔0.8ml，继续培养24h使其同步化处于静止期。

7.如权利要求1或3所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：所述A549细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM培养液，呈贴壁生长，每周传代3次，用体积浓度为0.25%胰蛋白酶消化，置于37℃及体积浓度为5%CO₂的培养箱中。

8.如权利要求7所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：待培养A549细胞融合至80%-85%时，取体积浓度为0.25%的胰酶消化后，用无血清培养液调整细胞密度为1×10⁶/ml，接种于6孔培养板内，每孔2ml，继续培养24h使其同步化处于静止期。 

9.如权利要求1或3所述的一种矽肺细胞模型的制备方法，其特征在于：所述矽尘为纯度为99%的二氧化硅结晶型标准品，粒子直径在0.5-10um之间，其中在1-5um之间的占80%；所述矽尘于180℃下干烤6 h灭菌，用无血清培养液DMEM配成浓度为3g/L的母液，于4℃储存。