[发明专利]针对间变性淋巴瘤激酶的单克隆抗体1A4及其用途

说明书

本发明公开了特异性结合间变性淋巴瘤激酶(ALK)的单克隆抗体1A4，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞，所述单克隆抗体的使用方法，以及包含所述单克隆抗体的组合物和试剂盒。

技术领域

本发明涉及免疫学领域。具体地，本发明涉及特异性结合间变性淋巴瘤激酶(ALK)的单克隆抗体1A4，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞，所述单克隆抗体的使用方法，以及包含所述单克隆抗体的组合物和试剂盒。

发明背景

肺癌是世界上最常见的癌症，每年新诊断出1400万新病例(P.Boyle,WorldCancer Report 2008(World Health Organization,2009))。随着人类分子遗传学的发展，已经鉴别出若干肺癌的致癌驱动突变，且其中一部分已经用作个体化医疗的生物标志物及靶点，例如EGFR突变(Rosell et al.,Lancet382,p720-731,2013)。

最近的遗传学研究显示大于6％的非小细胞肺癌患者具有间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因易位(Camidge&Doebele,Nat Rev Clin Oncol 9,p268-277,2012)。ALK易位最初是在白血病中鉴别到，然而随后在若干实体瘤中也检测出ALK易位(Chiarle et al.,NatRev Cancer 8,p11-23,2008)。正常时，ALK只在胚胎发生时表达且在成人组织中基本上是沉默的。然而，致癌性易位导致表达含有C-端自活化的ALK激酶结构域的融合蛋白(Chiarleet al.,Nat Rev Cancer 8,p11-23,2008)。在不同的癌症类型中已经鉴别到多种的5’端ALK融合配对物，在肺癌中主要是EML4。已经报道了至少8种不同的EML4-ALK融合模式。

临床上，被筛查出具有ALK易位的患者可以使用ALK激酶的ATP竞争性抑制剂克唑替尼进行靶向性治疗(Camidge&Doebele,Nat Rev Clin Oncol 9,p268-277,2012)。目前FDA批准的筛查ALK易位的方法基于原位杂交荧光技术(FISH)。然而，FISH需要对实验过程的精确标定以及需要高度熟练的技术人员以进行准确的定量。在许多病理学实验室中，FISH并不是常规测试。另一种检测ALK易位的方法是定量PCR。定量PCR是检测EML4-ALK融合模式的常规方法。然而这样的定量PCR平台是专门化的平台，并不适合于所有的病理实验室。而且，大部分常见定量PCR检测ALK的方法都限于EML4-ALK融合(Soda et al.,Nature448,p561-566,2007)，而其它的例如Klf5B-ALK和KLC1-ALK等则无法检测。

免疫组化(IHC)是目前在病理实验室中最广泛使用的检测方法，主要得益于其低廉的成本和简便的操作。已报道ALK易位导致在肺癌样品中存在功能性融合蛋白的表达，暗示可以使用针对ALK的抗体通过免疫组化(IHC)来筛查ALK易位(Thunnissen et al.,Virchows Arch 461,p245-257,2012)。然而，ALK易位造成的ALK融合蛋白在肺癌中的表达远远低于其在白血病中的表达，因此通过IHC检测肺癌中的ALK融合蛋白需要高灵敏度的抗体(Mino-Kenudson et al.,Clin Cancer Res 16,p1561-1571,2010)。

发明内容

本发明提供了一种高灵敏度的抗ALK小鼠单克隆抗体1A4，其可用于通过免疫组化检测癌症如肺癌中的ALK易位。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。