[发明专利]促进肺癌细胞凋亡的组合药物、药物制剂以及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗和医药领域，特别是涉及一种促进肺癌细胞凋亡的组合药物，一种促进肺癌细胞凋亡的药物制剂以及一种肺癌细胞凋亡的检测方法。

背景技术

肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，恶性肿瘤是危害人类生命健康的细胞性疾病，肿瘤细胞从生物体内正常细胞转化为恶性细胞，其形态、功能、代谢和增殖等都会发生深刻变化，可以看作是细胞的异常分化导致的其具有永生性。

绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮，近年来，随着吸烟和各种环境因素的影响，肺癌的发病率和死亡率逐年增长其死亡率已占癌症死亡率之首，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。在治疗肺癌的方向上，如何促进肺癌细胞的凋亡，就成为肿瘤治疗中一个关键问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新型的促进肺癌细胞凋亡的机制。

为了解决上述问题，本发明公开了一种促进肺癌细胞凋亡的组合药物，所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549，所述组合药物由3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及产生糖酵解作用的2-脱氧-D-葡萄糖组成。

优选地，所述组合药物中所述3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺与所述2-脱氧-D-葡萄糖的摩尔浓度比为1:1。

本发明还公开了一种促进肺癌细胞凋亡的药物制剂，以促进肺癌细胞凋亡的组合药物作为活性成分，并辅以可接受的要用载体；

所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549；

所述组合药物由3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及产生糖酵解作用的2-脱氧-D-葡萄糖组成。

优选地，所述组合药物中所述3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺与所述2-脱氧-D-葡萄糖的摩尔浓度比为1:1。

优选地，所述制剂为口服液、胶丸、口服混悬液、固体分散体、胶囊、缓释剂、颗粒剂、片剂、注射剂、软膏、贴剂或植入剂。

本发明还公开了一种肺癌细胞凋亡的检测方法，所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549，所述方法包括：

采用促进肺癌细胞凋亡的组合药物对所述肺癌细胞进行处理，同时采用所述组合药物中的两种组分分别对所述肺癌细胞进行处理，与未处理的肺癌细胞组成四组对比样品，所述组合药物由3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺以及产生糖酵解作用的2-脱氧-D-葡萄糖两种组分组成；

针对所述四组对比样品，进行预处理，所述预处理包括：采用胰酶消化所述肺癌细胞，并采用含有胎牛血清的培养基终止对肺癌细胞的消化，将终止消化后的肺癌细胞进行离心，弃除上清液；

对进行预处理后的四组样品分别进行流式细胞仪检测，并比对流式细胞仪的检测结果；

对进行预处理后的四组样品分别进行凋亡蛋白表达的检测，并比凋亡蛋白表达的检测结果。

优选地，所述组合药物中所述3-[2,4-双((3S)-3-甲基吗啉-4-基)吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-N-甲基苯甲酰胺与所述2-脱氧-D-葡萄糖的摩尔浓度比为1:1。

优选地，对进行一次处理后的四组样品分别进行流式细胞仪检测的步骤包括：

采用预冷的磷酸盐缓冲液重悬细胞并转入无菌的离心管中；

进行细胞计数，提取预设个数的肺癌细胞细胞，离心并弃除上清液；

采用磷脂结合蛋白与异硫氰酸荧光素的结合液重悬细胞，再加入所述结合液混匀，在室温下避光孵育后离心并弃除上清液；

再次加入所述结合液重悬细胞，加入碘化丙啶染色液混匀，冰浴避光放置后，进行流式细胞仪检测；

对进行一次处理后的四组样品分别进行凋亡相关蛋白的表达的步骤包括：

收集细胞沉淀，并提取蛋白；

采用蛋白质印迹法检测所述四组样品凋亡相关蛋白的表达。

与现有技术相比，本发明包括以下优点：