[发明专利]一种海绵共生蓝藻的分离培养方法

权利要求书

1.一种海绵共生蓝藻的分离培养方法，其特征在于具体包括以下步骤：

（1）海绵样品的筛选：从海洋中筛选颜色带有蓝绿或黄色的完整海绵样品；

（2）海绵样品的预处理：将筛选的海绵样品，浸泡在煮沸冷却后的消毒海水中，然后清除杂物并进行清洗，再将海绵样品切成0.5-1.5cm³大小的海绵块，将海绵块置于培养瓶中，同时将含有卡那霉素或新霉素的消毒海水加入到培养瓶中直至海绵块下半部分浸没在水中，上半部分露出水面，然后将培养瓶置于二氧化碳体积分数为0.035-0.065%的环境中，于25-32℃的高温胁迫条件下，采用150-250μmol/(m²·s)的光照强度，预处理24-48h；

（3）海绵样品选择：将预处理后的海绵块切成0.25-0.75cm³大小的海绵块，选取颜色较预处理前进一步加深的海绵块；

（4）海绵捣碎：将步骤（3）选取的海绵块置于食品粉碎机中，按1200-1500转/分的转速，捣碎2-4次，每次10-20秒；

（5）蓝藻培养：将步骤（4）捣碎后的海绵块与消毒海水按体积比1：3的比例混合后置于细胞培养板中，将细胞培养板置于培养箱中，于光照强度20-50μmol/(m²·s)，光照周期12/12小时，环境温度20-25℃的条件下培养10～15天，直至在细胞培养板中长出蓝藻藻落，挑取蓝藻藻落置于消毒海水中；

（6）单藻落选取：将步骤（5）得到的含有蓝藻藻落的消毒海水稀释10－20倍后，采用微孔滴管滴在消毒的载玻片上，通过显微镜镜检选取只有一个藻丝的微滴，将只有一个藻丝的微滴冲洗到细胞培养板的一个孔中，重复通过显微镜镜检选取只有一个藻丝的微滴直至细胞培养板的每个孔中均有含一个藻丝的微滴；

（7）单种培养

将步骤（6）得到的细胞培养板置于光照强度20-50μmol/(m²·s)，光照周期12/12小时，水温20-25℃的条件下培养10～15天后，即得到海绵共生蓝藻单藻落。

2.根据权利要求1所述的一种海绵共生蓝藻的分离培养方法，其特征在于：所述的含有卡那霉素的消毒海水中卡那霉素的浓度为100-200mg／L，或者所述的含有新霉素的消毒海水中新霉素的浓度为100-200mg／L。

3.根据权利要求2所述的一种海绵共生蓝藻的分离培养方法，其特征在于：所述的消毒海水的pH值为8.5。