[发明专利]链霉菌菌株SPC6-50-1的诱变筛选方法及应用

权利要求书

1.链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1的诱变筛选方法，其特征在于，是通过亚硝基胍（NTG）对天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor A3(2)）和链霉菌（Streptomyces sp.）Lzsg 6进行诱变，得到链霉菌突变体库，再通过利福平及链霉素筛选，得到转录系统和翻译系统发生突变的菌株。

2.根据权利要求1所述的链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1的诱变筛选方法，其特征在于，包括有以下步骤：

1）化学诱变剂NTG对链霉菌进行诱变：将天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor A3(2)） 和链霉菌（Streptomyces sp.）Lzsg 6制备为菌悬液，以NTG母液对菌悬液进行诱变，得到NTG处理过的菌悬液； 

2）以利福平筛选转录系统发生突变的菌株：将步骤1）得到的NTG处理过的菌悬液均匀涂于含有5μg/ml利福平的高氏一号培养基平板上，30℃培养7-15 d，将长出的单菌落分别接于装有5 mL液体培养基YEME或TSBY的试管中，然后再制备成诱变菌悬液，进行NTG诱变，将处理过的菌悬液均匀涂于含有10μg/ml利福平的高氏一号培养基平板上，反复，进行15 μg/ml，20 μg/ml，25 μg/ml，30 μg/ml，35 μg/ml， 40 μg/ml， 45 μg/ml，50 μg/ml的利福平筛选，得到利福平筛选后菌株；

3）以链霉素筛选翻译系统发生突变的菌株：将步骤2）得到的利福平筛选后菌株再进行NTG诱变，方法与步骤2）相同，处理过的菌悬液均匀涂于含有5 μg/mL链霉素、50 μg/mL利福平的高氏一号培养基平板上，30℃培养 7-15 d，将长出的单菌落分别接于装有5 mL液体培养基YEME或TSBY的试管中，然后再制备成诱变菌悬液，进行NTG诱变，将处理过的菌悬液均匀涂于含有10 μg/mL链霉素、50μg/mL利福平的高氏一号培养基平板上，反复，利福平浓度均为50 μg/mL，链霉素为15μg/ml，20 μg/ml， 30 μg/ml， 40 μg/ml， 50 μg/ml， 60 μg/ml， 70 μg/ml，80 μg/ml，90 μg/ml，100 μg/ml依次递增，得到链霉素、利福平筛选后的菌株。

3.一株以权利要求1或2所述的诱变筛选方法诱变筛选得到的链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1，其特征在于，所述链霉菌的保藏号为CGMCC No.8372。

4.权利要求3所述的链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1在制备抗生素中的应用。

5.权利要求1或2所述的链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1的诱变筛选方法在激活链霉菌沉默基因中的应用。

6.权利要求1或2所述的链霉菌（Streptomyces linzensis）菌株SPC6-50-1的诱变筛选方法在制备抗生素中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，是将链霉素、利福平筛选后的菌株于高氏一号平板上划线，收集孢子保存，接于装有液体培养基YEME或TSBY的三角瓶中，在30℃，200 r/min的摇床上培养3-7d，12000 r/min 离心1 min，取上清即可。