[发明专利]一种临床检测EGFR基因突变的HRM方法及试剂盒

权利要求书

1.    一种基于HRM技术的EGFR基因突变检测PCR试剂盒，其特征在于：包含引物对A、B、C、D和/或E；

其中，引物对A用于检测EGFR基因18号外显子G719X突变，其为以下三对序列中的一对：

A_F1：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT，

A_R1：CCTTATACACCGTGCCGA；或

A_F2：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTG，

A_R2：GTCCCTTATACACCGTGCC；或

A_F3：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT，

A_R3：CTTATACACCGTGCCGAAC；

引物对B用于检测EGFR基因19号外显子缺失突变：E746_A750del、E746_T751>I、E746_T751del、E746_S752>A、E746_S752>V、E746_S752>D、E746_T751>A、L747_A750>P、L747_T751>Q、L747_E749del、L747_T751del、L747_S752del、L747_A750>P、L747_T751>S、L747_T751del、L747_T751>P，其为以下三对序列中的一对：

B_F1：AAGTTAAAATTCCCGTCGCTA，

B_R1：TTCCTTGTTGGCTTTCGG；或

B_F2：GTTAAAATTCCCGTCGCTATCA，

B_R2：TTCCTTGTTGGCTTTCGG；或

B_F3：AAATTCCCGTCGCTATCAAG，

B_R3：AGGATTTCCTTGTTGGCT；

引物对C用于检测EGFR基因20号外显子S768I突变，其为以下三对序列中的一对：

C_F1：AGGAAGCCTACGTGATGG，

C_R1：GTGGAGGTGAGGCAGAT；或

C_F2：AGGAAGCCTACGTGATGG，

C_R2：GGTGGAGGTGAGGCAGA；或

C_F3：AGGAAGCCTACGTGATGG，

C_R3：TGGAGGTGAGGCAGATG；

引物对D用于检测EGFR基因20号外显子T790M突变，其为以下三对序列中的一对：

D_F1：CACCGTGCAGCTCATCA，

D_R1：GGACATAGTCCAGGAGGC；或

D_F2：CACCGTGCAGCTCATCA，

D_R2：CCGGACATAGTCCAGGAG；或

D_F3：CACCGTGCAGCTCATCA，

D_R3：CGGACATAGTCCAGGAGG；

引物对E用于检测EGFR基因21号外显子L858R、L861Q突变，其为以下三对序列中的一对：

E_F1：AGCATGTCAAGATCACAGATTT，

E_R1：TGGTATTCTTTCTCTTCCGCAC；或

E_F2：GCAGCATGTCAAGATCACAG，

E_R2：TTCTTTCTCTTCCGCACCC；或

E_F3：AAACACCGCAGCATGTC，

E_R3：TTCTTTCTCTTCCGCACCC。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包含EGFR突变阴性对照和阳性对照。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包含PCR试剂和饱和荧光染料。

4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于包括如下步骤：提取待测样本DNA；配制包含待测样本DNA、引物对、PCR试剂和饱和荧光染料的PCR反应体系进行PCR扩增；对PCR产物进行HRM分析扫描。

5.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于：所述的PCR反应体系为：Taq buffer 1μL，dNTPs 1μL，Taq 1μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，LC GREEN 1μL，MgCl₂ 0.8μL，ddH₂O 3.2μL，DNA 1μL。