[发明专利]ZFP28的变异位点在制备诊断精神分裂症的试剂盒中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及诊断领域，更具体地涉及ZFP28基因的单核苷酸变异位点在制备诊断精神分裂症的试剂盒中的用途。

背景技术

精神分裂症（Schizophrenia）是一种常见的病因尚未完全阐明的重型精神疾病，患者表现为特殊的思维、情感、知觉和行为等方面的障碍和精神活动与环境不协调。流行病学研究表明精神分裂症在人群中的终生患病率约为1%。该病多为青春后期和成年早期发病，男性和女性的发病率相当，但是男性的平均发病年龄较女性早。另外，该病的发生存在种族及地域的差异，心理、社会等环境因素对于发病也有影响。

有证据表明，遗传因素在精神分裂症的发病中发挥着重要作用，遗传度高达81%。对精神分裂症易感基因的探索一直是精神分裂症研究的热点。

以往的遗传学分析，包括连锁分析和关联研究。连锁分析是一项基于家系的基因定位的方法。其基本原理是：根据基因在染色体上呈直线排列，不同基因相互连锁成连锁群的原理，即应用被定位的基因与同一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的特点进行定位。比如，2003年Williams N.M.等人使用372个微卫星标记进行连锁分析，标记间的平均距离为10cM，发现10q25.3-26.3、17p11.2-25.1和22q11区域与精神分裂症存在连锁。关联研究是基于连锁不平衡（linkage disequilibrium，LD）的原理。在人群中，不同基因座位上两个或多个位点的某个等位基因出现在同一单体型上的频率与预期的随机频率之间存在明显差异的现象。处于连锁不平衡区域的两个位点的等位基因在传递给下一代时经常一起传递。关联研究是通过比较患者组和对照组间多态性遗传标记在等位基因、基因型和单倍型频率分布的差异，得到这一遗传标记和疾病基因关联的相对危险度，分析该位点是否和疾病直接相关，或者寻找和相关多态性遗传标记处连锁不平衡区域的疾病易感基因。全基因组关联研究（GWAS）从整个基因组层面无偏差地分析基因组中遗传变异与疾病的关系。如O'DonovanM.C.等对欧裔人群的GWAS研究中，发现ZNF804A与精神分裂症存在相关性。

发明内容

根据本发明的一些实施方式，提供ZFP28基因变异位点在制备诊断精神分裂症的试剂盒中的用途。在一些实施方式中，ZFP28基因变异位点选自如下一个或多个：c.1441T>C、c.961G>A、c.1052T>C、c.1081C>T、c.1511C>T、c.1170G>T、c.1208A>G和c.2017T>C。在一个优选实施方式中，ZFP28基因变异位点为c.1441T>C。

在本发明上下文中，c.1441T>C表示ZFP28编码序列的第1441位核苷酸由T变为C；c.961G>A表示ZFP28编码序列第961位核苷酸由G变为A；依此类推。

根据本发明的一些实施方式，提供一种用于诊断精神分裂症的试剂盒，其含有针对ZFP28基因变异位点的引物对，所述ZFP28基因变异位点选自如下一个或多个：c.1441T>C、c.961G>A、c.1052T>C、c.1081C>T、c.1511C>T、c.1170G>T、c.1208A>G和c.2017T>C。

在一些实施方式中，试剂盒还可以根据需要含有基因组DNA提取试剂和/或PCR反应体系试剂。任何本领域公知的适当的DNA提取试剂和PCR反应体系试剂均可用于本发明的试剂盒。在一些实施方式中，PCR反应体系试剂包括dNTP、DNA聚合酶、PCR反应缓冲液。在一个具体的实施方式中，对包括突变位点上下游约300bp的片段进行PCR扩增。然而技术人员理解，在包括突变位点的上下游适当区域内进行扩增，均可以实现对突变位点的检测，包括但不限于突变位点上下游300bp范围内、250bp范围内、220bp范围内、200bp范围内、180bp范围内、150bp范围内、120bp范围内、100bp范围内。引物设计的原则如下：引物长度在15-30bp，优选15-25bp；G+C含量40-48%，优选43-46%；引物内部和引物之间无互补序列，无发卡结构形成；引物Tm值在40到60℃之间，上下游引物的Tm值相差不超过2℃；确保各引物的综合评分达到90分以上。因此，针对各变异位点的引物对并不限于具体实例中所用的引物对。