[发明专利]一种用于糖蛋白检测的电化学方法

权利要求书

1.一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：包括以下步骤：

(A)制备苯硼酸-生物素-纳米金复合物，包括以下子步骤：

A1：纳米金粒子的合成，采用前驱体为HAuCl₄，还原剂为柠檬酸钠，将HAuCl₄溶液加热至沸腾，然后快速加入柠檬酸钠溶液，继续加热沸腾10-50分钟，然后将溶液冷却到室温，即得到柠檬酸稳定的纳米金粒子溶液；

A2：苯硼酸-生物素-纳米金复合物的合成：用移液枪取出上述纳米金粒子溶液，然后加入包含三(2-羧乙基)膦和多肽的PBS溶液，PBS溶液的pH 为7-8，室温搅拌1小时以上得到生物素修饰的纳米金，再向反应溶液中加入4-巯基苯硼酸溶液，继续搅拌0.5小时以上得到苯硼酸-生物素-纳米金复合物；

A3：苯硼酸-生物素-纳米金复合物的纯化：将A2得到的反应产物离心分离，弃除上层未反应的多肽和三(2-羧乙基)膦，将所得沉淀物用pH =7-8的PBS溶液洗涤，将得到的纯化后的硼酸-生物素-纳米金复合物用PBS溶液分散，低温保存备用；

（B）工作电极的制备，包括以下子步骤：

B1：在金电极表面组装巯基化的核酸适配体；

B2：采用6-巯基己醇和牛血清蛋白封闭未反应的金电极表面；

B3：将含糖蛋白的待测物修饰到B2得到的电极表面；

B4：将步骤A制备得到的苯硼酸-生物素-纳米金复合物修饰到B3得到的电极表面；

B5：将链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物修饰到B4得到的电极表面；

B6：将B5得到的电极浸泡于p-APP溶液中，催化产生电活性物质对氨基酚；

（C）电化学测试：将步骤（B）制备得到的电极作为工作电极进行电性能测试。

2.根据权利要求1所述的一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：步骤A2和A3中所述的PBS溶液的PH值为7.4。

3.根据权利要求1所述的一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：步骤B1中所述的核酸适配体为：5'-SH-(CH₂)₆-GATTGAAAGGTCTGTTTTTGGGGTTGGTTTGGGTCAATA。

4.根据权利要求1所述的一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：步骤（C）中电化学测试采用三电极体系，制备的金电极作为工作电极，饱和的Ag/AgCl电极为参比电极，Pt电极为辅助电极。

5.根据权利要求1所述的一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：步骤A3得到的苯硼酸-生物素-纳米金复合物低温保存备用，所述的保存温度为0℃-8 ℃。

6. 根据权利要求1所述的一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：步骤A3得到的苯硼酸-生物素-纳米金复合物低温保存备用，所述的保存温度为4 ℃。