[发明专利]一种蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法

权利要求书

1.本发明公开了一种将抗氧化剂应用于蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法。

2.如权利要求1所述的蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法，其步骤为，(1)以蝴蝶兰类原球茎切块为外植体，初始诱导在常规培养基添加5mg/L6-BA、甘露醇12g／L。(2)培养18天左右外植体出现胚性母细胞，将培养物转接到附加甘露醇12g／L，添加抗氧化剂的培养基。(3)第30天得到胚性愈伤组织块时，转入附加5mg/L6-BA、甘露醇6g/L及抗氧化剂的培养基培养。(4)约第60天得到幼嫩类原球茎，转入无激素(6-BA)、无附加甘露醇，仍附加抗氧化剂培养基。(5)继续培养可得到大小、成熟度较一致的类原球茎，同步化约80％。

3.如权利要求2所述的一种蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法，其特征在于：培养基添加的抗氧化剂不与培养基成分化学反应，至少包括以下合成或天然物质：亚硫酸钠、亚硒酸钠、维生素C(抗坏血酸)、半胱氨酸、谷胱甘肽、维生素E、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、类胡萝卜素，应用时可选一种或数种组合。

4.如权利要求3所述的一种蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法，其特征在于培养基添加抗氧化剂，固体抗氧化剂亚硫酸钠、亚硒酸钠、维生素C(抗坏血酸)、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、类胡萝卜素的一种或数种组合用量合计为100-300mg／L培养基，液体维生素E用量为1-3ml／L培养基。

5.如权利要求3所述的一种蝴蝶兰蝴蝶兰体细胞胚发生同步化调控方法，其特征在于抗氧化剂亚硫酸钠、亚硒酸钠溶入培养基一起高压灭菌。维生素C(抗坏血酸)、半胱氨酸、谷胱甘肽配成水溶液在超净工作台过滤除菌，加入未冷凝的已高压灭菌培养基。维生素E、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、类胡萝卜素融入吐温20，维生素E与吐温20体积比为1∶1，丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、类胡萝卜索与吐温20重量体积比为1∶2(g：ml)，再加入培养基一起高压灭菌。