[发明专利]一种丝状真菌分生孢子PCR方法

权利要求书

1.一种丝状真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，

包括以下步骤：

(1)将丝状真菌接种于培养基上进行培养；

(2)丝状真菌培养物在培养基上长出肉眼可见分生孢子，制备分生孢子悬浮液，用于PCR扩增；

(3)1～1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。

2.根据权利要求1所述的丝状真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养基采用PDA培养基，培养温度为28℃。

3.根据权利要求1所述的丝状真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步骤(2)中所述分生孢子悬浮液的制备方法为，丝状真菌在培养基上长出肉眼可见分生孢子，用无菌牙签或无菌接种环收集分生孢子，将收集到的分生孢子转入含有无菌水的1.5ml的离心管中，震荡制成分生孢子悬浮液，用血球计数板计数。

4.根据权利要求1所述的丝状真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步骤(2)丝状真菌分生孢子PCR反应体系包括1_×PCR缓冲液，0.2mM dNTP混合物，1μM的上下游引物，0.4mM MgCl₂，丝状真菌分生孢子有效浓度为10⁵～10⁸CFU/ml，Taq DNA聚合酶2U，无菌水补齐至50μl，进行PCR反应。

5.根据权利要求1所述的丝状真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步骤(2)中丝状真菌中黑曲霉分生孢子PCR扩增反应体系对其中分生孢子浓度要求严格，体系中黑曲霉分生孢子浓度大于10⁸CFU/ml时，则不能扩增，其分生孢子有效浓度为10⁵～10⁸CFU/ml，浓度为10⁷CFU/ml。