[发明专利]鸭出血性卵巢炎、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸭出血性卵巢炎、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

鸭出血性卵巢炎是2010年我国新发生的一种以蛋鸭和种鸭突发性产蛋下降为主要特点的新型流行性疾病，主要导致卵泡变形、变性，卵泡膜充血、出血，输卵管炎性病变。种鸭发病后种蛋的受精率和孵化率降低。商品肉鸭亦可感染，出现死淘率增加。该病自发生以来给养鸭业造成了严重的经济损失。

在病原学鉴定中，疫病流行之初，曹贞贞、张存等最先报道新分离病毒与黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群（Ntaya virus group）的巴格扎病毒（Bagaza virus）具有相近的遗传进化关系,但遗传距离介于病毒种的水平（曹贞贞、张存等．鸭出血性卵巢炎的初步研究．中国兽医杂志，2010，46(12):3－6.）。随着病原学研究的深入，李泽君、苏敬良等人的研究表明，新发病毒的E基因和NS5基因与坦布苏病毒相应基因的核苷酸同源性在88%以上，氨基酸同源性高达97%（李泽君．鸭坦布苏病毒病病原的分离鉴定及生物学特性研究.中国家禽，2011，33(17):34-35.苏敬良．引起鸭产蛋下降综合征的BYD病毒感染研究.中国家禽，2011，33(17):32-34.）。我们在某大型鸭场的发病种鸭上分离到一株病毒—WFG36株。病毒全基因编码序列的同源性分析表明，WFG36株病毒与坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）的同源性高达90%，属于同一个种的病毒。

禽流感（H9亚型）（Avain Influenza H9subtype）是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合征，传染性强，死亡率高，广泛发生于世界各地，给养禽业造成了严重危害。

对于鸭出血性卵巢炎和禽流感（H9亚型）的防控，目前尚无特效药物和疗法，主要通过加强饲养管理和疫苗免疫等措施进行预防和控制。国内外已有上市的禽流感（H9亚型）单一传统疫苗，未有鸭出血性卵巢炎疫苗和相关联苗。由于两种疾病是鸭业养殖中的高发疾病，均需要通过免疫疫苗进行预防，为减少多次抓鸭的注射应激，降低生产成本，我们在单一灭活疫苗的基础上开发出更好预防鸭出血性卵巢炎和禽流感（H9亚型）的二联灭活苗产品。

发明内容

本发明的目的在于利用本发明人自行分离的一株鸭坦布苏病毒和一株H9亚型禽流感病毒作为疫苗生产用毒株，制备一种鸭出血性卵巢炎、H9亚型禽流感二联油乳剂疫苗，一次免疫即可有效预防鸭出血性卵巢炎和H9亚型禽流感两种疾病，同时可以降低养殖风险，减少劳动强度，保证公众健康。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

1.本发明涉及的一种鸭出血性卵巢炎、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（或鸭出血性卵巢炎、禽流感H9亚型二联灭活疫苗），其特征在于该二联灭活疫苗同时含有灭活的鸭坦布苏病毒WFG36株和灭活的H9亚型禽流感病毒LG1株，其中鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）WFG36株（原命名为：黄病毒（DuckFlavivirus）WFG36株）已于2011年4月12日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为：CGMCCNo.4718；H9亚型禽流感病毒LG1株为商品化疫苗，鸡新城疫、禽流感H9亚型二联灭活疫苗的生产毒种，产品批准文号：兽药生字（2010）150252152。

2.本发明所述鸭出血性卵巢炎、禽流感H9亚型二联灭活疫苗的制备方法为：

（1）将鸭坦布苏病毒CGMCCNo.4718株种毒接种易感鸡胚，经37℃孵育收获胚体、胚液和绒毛尿囊膜，研磨混合制备成病毒液，加入甲醛溶液至总量（体积比）的0.1%，37℃灭活24小时；

（2）取H9亚型禽流感病毒LG1株种毒接种9～11日龄健康易感鸡胚孵育后无菌收获鸡胚尿囊液，凝集价低于1∶256（微量法）者应弃去；加入甲醛溶液至总量的0.1%，37℃灭活48小时；

（3）将灭活后的鸭坦布苏病毒液和灭活后的H9亚型禽流感病毒液等量混合，使0.1ml水相中鸭坦布苏病毒含量不低于10^5.0ELD₅₀，H9亚型禽流感病毒含量不低于10^7.0EID₅₀；按常规法制备成油佐剂灭活疫苗。

3.给鸭接种有效剂量的鸭出血性卵巢炎、禽流感H9亚型二联灭活疫苗，能使接种鸭获得特异免疫力，有效预防鸭出血性卵巢炎和H9亚型禽流感病毒感染。