[发明专利]一种高效提纯纽莫康定B0的方法

权利要求书

1.一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，包括以下步骤：

（1）将含有纽莫康定B₀的发酵液pH调至2.0～4.0，过滤，菌渣用低分子醇浸提，得浸提液；

（2）将步骤（1）所得的浸提液蒸馏出低分子醇，并浓缩至浓缩混合物中液体所含的纽莫康定B₀ ≤100mg/L，然后向浸提液浓缩混合物中加入硅藻土裹晶，加去离子水离心得到含有纽莫康定B₀的白色固体；

（3）将步骤（2）所得的离心固体加入乙醇溶解，充分搅拌，再加入活性炭，充分搅拌脱色，过滤得到无色滤液；

（4）将步骤（3）所得的无色滤液浓缩至纽莫康定B₀含量为250000～300000mg/L，加入氯仿混合均匀，过硅胶柱，并用氯仿与甲醇的混合液对硅胶柱进行预洗、洗脱，收集洗脱液；

（5）将步骤（4）所得的洗脱液浓缩至氯仿含量≤0.5%，然后将洗脱液浓缩混合物加入多相体系中结晶，得到潮晶，并在真空下干燥得成品。

2.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（2）中硅藻土的目数为100～150，所述硅藻土的加入重量为浸提液浓缩混合物重量的3～6倍，并使硅藻土充分吸附浸提液浓缩混合物中的纽莫康定B₀；所述去离子水的加入重量为浸提液浓缩混合物与硅藻土的重量之和，加入去离子水后并充分搅拌。

3.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（3）中加入的乙醇的重量为离心固体重量的2～4倍；所述活性炭的目数为140～200，所述活性炭的加入重量为离心固体重量的0.05～0.1倍。

4.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中过硅胶柱上柱液为滤液浓缩得到的滤液浓缩混合物加入氯仿并充分搅拌、溶解制成的氯仿溶液，加入氯仿的量为滤液浓缩得到滤液浓缩混合物重量的3～6倍。

5.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中硅胶柱使用的硅胶目数为200～400，所述硅胶使用量为滤液浓缩混合物重量的2～3倍；装柱溶剂为氯仿，装柱所使用的氯仿量为硅胶重量的1～2倍；冲柱溶剂为氯仿，冲柱所使用的氯仿量为滤液浓缩混合物重量的3～8倍；上柱量为硅胶使用量的0.1～0.2倍。

6.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中对吸附完全的硅胶柱预洗所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为5：1，所述预洗的终点为预洗液中无前杂；对预洗后的硅胶柱进行洗脱所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为3：1，所述洗脱的终点为洗脱液中无纽莫康定B₀。

7.根据权利要求6所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述预洗液中前杂和洗脱液中纽莫康定B₀测定均采用TLC监控，硅胶板为正相硅胶板；所述预洗液中前杂测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比8:1组成的混合液；所述洗脱液中纽莫康定B₀测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比2:1组成的混合液；所述TLC点板显色剂为磷钼酸，热风枪烘烤显色。

8.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（5）中多相溶剂体系为乙酸乙酯、异丙醇、石油醚的一种或几种的组合；所述多相溶剂的量为洗脱液浓缩混合物重量的5～8倍。

9.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（5）中结晶溶解温度为50～60℃，析晶温度为0～5℃；所述干燥的条件为温度为45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥时间为18～24h；干燥后固体水份≤2%。

10.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：步骤（2）、（4）、（5）中所述的浓缩为真空条件下，浓缩温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa。