[发明专利]一种1，5-脱水山梨醇免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及1,5-脱水山梨醇检测领域，具体涉及一种1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

1,5-脱水山梨醇(1,5-anhydro glucitol，1,5-AG)，结构式如式（III）所示：

1,5-脱水山梨醇(1,5-anhydro glucitol，1,5-AG)又称为1,5-脱水葡萄糖醇，是一种具有吡喃环结构的六碳单糖。1,5-AG的结构与葡萄糖十分相似，两者区别仅在于葡萄糖C-1位置上的羟基被氢所取代。1,5-AG主要存在于人体血液、脑脊液及各组织器官中，血清中1,5-AG浓度一般为12-40mg/L，其代谢较稳定。当患有糖尿病时血清1,5-AG浓度会显著降低，其机理是：糖尿病患者大量葡萄糖由尿中排出竞争性的抑制了1,5-AG经肾小管的重吸收，使1,5-AG大量经尿排出，导致血液中1,5-AG浓度下降，且下降程度与糖尿病的严重程度显著相关。研究表明：血液中1,5-AG与葡萄糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbAlc)、果糖胺(FMN)都呈显著的负相关，其水平可反映近一周内的血糖和尿糖情况，是糖尿病诊断与治疗的灵敏指标，日本于上世纪九十年代初就把1,5-AG作为糖尿病诊断和疗效检测的重要指标。此外，1,5-AG还有其它多种临床应用价值，例如，1,5-AG能反映餐后高血糖峰值，可作为非糖尿病人群监测餐后高血糖相关的心血管危险发生率的指标；血浆或尿中的1,5-AG浓度还能很好的反映慢性肾功能衰竭病人的肾小管重吸收功能，因为1,5-AG重吸收系统比葡萄糖重吸收系统更容易受损。

检测1,5-脱水山梨醇的方法有很多，如高效液相色谱法、微柱层析法、化学发光法等，各有其优缺点。其中高效液相色谱法操作比较复杂，且试剂需现用现配，不能长期保存，因此不适合大批量临床检测使用；微柱层析法、化学发光法均需昂贵的专用仪器，操作繁琐，也不适合用于临床常规检验。目前适用于自动化分析仪的1,5-AG测定方法主要是酶法，包括ADP-HK-NADPH方法和GK-PROD方法。但是，现有的酶法测定试剂盒成本较高、价格昂贵，且大多为干粉试剂，稳定性、灵敏度、特异性等方面均不能满足临床检验的要求。

直接用1,5-脱水山梨醇免疫动物无法获得抗1,5-脱水山梨醇特异性抗体。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的1,5-脱水山梨醇检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。

均相酶免疫检测法，以其检测速度快、操作简单、灵敏度高、特异性强且可以在全自动生化分析仪上实现对小分子物质的高通量快速化检测的优点，开始得到越来越多的关注。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种既安全又可快速、高效、灵敏、准确检测出待测样本中1,5-脱水山梨醇含量的1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂及其制备方法，以及可以与各种类型的自动生化分析仪联用、对检测人员要求较低的1,5-脱水山梨醇免疫检测方法。

为了实现上述目标，本发明采用的技术方案是：

一种1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂，其特征在于，包括：抗1,5-脱水山梨醇特异性抗体、用于检测抗1,5-脱水山梨醇特异性抗体-1,5-脱水山梨醇复合物的指示试剂；所述抗1,5-脱水山梨醇特异性抗体由1,5-脱水山梨醇免疫原免疫动物得到，所述1,5-脱水山梨醇免疫原的结构式如式（I）所示：

式中，R为连接基团-(CH₂)_n-COO-，n为1至20之间的整数，载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽；所述指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂或化学发光试剂。

前述的1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂，所述的R为-(CH₂)₄-COO-；所述的载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白。

前述的1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；所述酶标偶联物包括葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-半抗原酶标偶联物；所述酶的底物为葡萄糖-6-磷酸。

前述的1,5-脱水山梨醇免疫检测试剂，所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-半抗原酶标偶联物由葡萄糖-6-磷酸脱氢酶与1,5-脱水山梨醇衍生物偶联形成，所述1,5-脱水山梨醇衍生物的结构式如式（II）所示：

R为-(CH₂)_n-COO-，n为1至20之间的整数。