[发明专利]基于多项目混合荧光免疫反应的分光分析法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药检测技术，特别涉及一种基于多项目混合荧光免疫反应的分光分析法。

背景技术

免疫标记技术是将某种可微量或超微量测定的物质(如放射性核素、荧光染料、酶等)作为示踪物标记于抗体或抗原上制成标记物，利用抗原-抗体特异性反应原理，建立相应的反应体系，以检测标记物的有无或含量来间接反映样品中待检抗原或抗体的有无或量的多少。

荧光免疫技术属于标记免疫技术的一种。是以荧光染料为示踪物标记抗体或抗原，利用抗原抗体反应的原理，实现定性或定量分析的技术。应用上主要分两大类：免疫组织化学(包括流式细胞术)和荧光免疫测定。免疫组织化学主要应用荧光染料标记抗体，与组织或细胞中的抗原结合，在专用显微镜下观察经激发光激发的荧光，对相应的抗原进行定性或/和定位，也称为荧光抗体技术；或与混合细胞成分作用，利用流式细胞仪进行细胞的分类研究。

荧光免疫测定是用荧光染料标记抗体或抗原，利用抗原抗体反应的特异性和荧光染料的检测灵敏度，对生物材料(血液、尿液等体液或组织提取液、细胞培养液等)中水溶性成分进行定性或定量测定。

近年来，免疫金斑点渗滤法和免疫层析法得到了迅速的发展和应用，其中也包括了荧光法。其基本原理就是将第一抗体(也称捕获抗体)标记在硝酸纤维素(NC)膜上或其它固相载体的表面上，成为固相抗体，然后将待检标本与标记了第二抗体的胶体金或标记了荧光染料的第二抗体(荧光结合物)先后或同时与捕获抗体作用，在NC膜上相应区域就形成了反应条带，如果是胶体金就形成肉眼可见的红色条带，如果是荧光结合物，则需在专用仪器内读取荧光强度，根据胶体金条带的深浅或荧光强度得出定性或定量的结果。这两种方法，操作简便，反应快捷，被列入POCT(Point Of Care Test)范畴，受到广泛的关注。

一般而言，上述方法一个试验只能检测一个项目。以免疫层析法为例，每个测试条只能检测一个项目，比如肌钙蛋白I(TnI)测试条，只能检测血清TnI浓度，如果想同时检测肌红蛋白和肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的浓度，只有在同一个测试条上3个相邻的位置上分别标记3种相应的捕获抗体，成为所谓的“3合1”(3 in 1)测试条。目前，这种组合测试条仅是个例，“层析”条的有限空间限制了更多项目的组合及其应用。

荧光染料研究随着荧光标记技术的广泛应用取得了飞跃的进步。时间分辨荧光分析法的展开、双光子的应用和量子点的研究开拓了荧光染料发展的新的领域。在传统的荧光染料领域也取得了令人瞩目的进展。例如仅Alexa Fluor系列荧光染料其发射光谱从近紫外到近红外有约20种之多，这就为制备具有不同发射光谱的荧光结合物提供了范围广泛的选择可能。

每种荧光染料均有其特定的激发光波长和相应的发射光波长。获取激发光的途径主要是：连续白光光源加窄带滤光片获取所需单色光；激光二极管和单色LED光源。得益于科技进步和制作工艺的发展，在这些领域都取得了迅速的发展。从近紫外到近红外光波段，可以制备出任意波长的窄带滤光片；在激光领域，可以定制近紫外到近红外光波段内任意波长的激光二极管。这样就可以用不同波长的激光二极管组合成激发光源；也可以用连续白光光源，如卤素灯或氙灯与适用的滤光片组合以获取激发光源；同时，LED单色光源的研发及其功率的提高，其作为激发光源应用的前景值得期待。

在生物化学定量测定中，常利用反应中形成的特征性发色基团在特定吸收光谱吸光度的改变实现定量分析。目前广泛使用的自动化生化分析仪中均利用棱镜或光栅逐一对反应杯的透射光进行分光，在计算机的控制下，测定各个反应杯的特定吸收光谱吸光度的改变而实现大量样本的快速检测，这一技术俗称为“后分光技术”。其要点在于，将混合光通过棱镜或光栅解析还原成“单色光”，在特征光谱的位置设置光电转换元件(如光电管)固定接受此处的光强度变化，系列的光电管形成一个阵列，可以根据使用者的指令，捕捉特定波长处的光电信息，从而滤除无关杂色光的干扰，进而对特定发色基团作出精密的定性或定量分析。

发明内容

本发明的目的，就在于提供一种基于多项目混合荧光免疫反应的分光分析法。

本发明的目的是这样实现的：一种基于多项目混合荧光免疫反应的分光分析法是，建立多项目混合荧光免疫反应体系和相应的检测体系，根据荧光染料分别具有特定的激发光波长与发射光波长的性质，在检测体系中通过将某一荧光染料激发光波长与与其相应的发射光波长对应的信号接收器联动，逐一、连续进行分析，从而实现分别检测；

所述多项目混合荧光免疫反应体系的建立包括以下步骤：