[发明专利]一种检测TERT单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种检测TERT单核苷酸多态性的方法，包括下述步骤：

(1)、从样本的尿液和正常组织中分别提取DNA；

(2)、针对需要检测的突变位点的不同，以从样本尿液和正常组织中提取的DNA为模板，分别以与突变位点相对应的引物对P1、P2或P3为引物，进行TaqMan Probe Real time PCR扩增，其中与1,295,228G>A突变位点对应的引物对P1为：

P1Fm:CGGGTCCCCGGCCCAGCCCCT，

P1Rm:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P1Fn:CGGGTCCCCGGCCCAGCCCCC，

P1Rn:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

与1,295,250G>A突变位点对应的引物对P2为：

P2Fm:CGCCCCGTCCCGACCCCTT，

P2Rm:CGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P2Fn:CGCCCCGTCCCGACCCCTC，

P2Rn:CGCCGCGAGGAGAGGGCG；

与1,295,242-1,295,243GG>AA突变位点对应的引物对P3为：

P3Fm:CGTCCCGACCCCTCCCGGGTTT，

P3Rm:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P3Fn:CGTCCCGACCCCTCCCGGGTCC，

P3Rn:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

(3)、确定△Ctu与△Ctn之间的大小，当△Ctu-△Ctn<0尿液样品中存在突变位点；△Ctu-△Ctn≥0尿液样品中不存在突变位点；其中△Ctu为尿液样品中突变引物与正常引物达到扩增阈值时的循环数的差值；△Ctn为正常组织样品中突变引物与正常引物达到扩增阈值时的循环数的差值。

2.根据权利要求1所述的一种检测TERT单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述TaqMan Probe Real time PCR扩增的反应条件为：

第一步预变性：95℃30秒，重复1次；

第二步PCR反应：95℃5秒和60℃30秒，重复40次。

3.根据权利要求1所述的一种检测TERT单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述TaqMan Probe Real time PCR扩增体系中含有：12.5μl2×Premix Ex Taq、0.5μl PCR Forward Primer(10μM)、0.5μl PCR Reverse Primer(10μM)、1μlProbe、2μl DNA模板和8.5μl d H₂O(灭菌蒸馏水)。

4.根据权利要求1所述的一种检测TERT单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述TaqMan Probe Real time PCR扩增的反应TaqMan Probe序列为：

5’-CTCCCAGCCCCTCCCCTTCCTTTCCGCGGC-3’。