[发明专利]一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器

权利要求书

1.一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于它是按以下步骤进行：

步骤一：将利用Hummer方法制备的氧化石墨烯粉末，于双蒸水中超声分散10～15min，得到浓度为0.2～0.5mg/mL的氧化石墨烯悬浊液；将溴甲酚紫于浓度为0.01M的NaNO₃溶液中分散，得到浓度为1.0×10^-3～2.0×10^-3M的溴甲酚紫溶液；

步骤二：取5～10μL步骤一得到的氧化石墨烯悬浊液，滴涂到玻碳电极表面，置于红外灯下干燥，干燥后冷却至室温，得到氧化石墨烯修饰的玻碳电极；将氧化石墨烯修饰的玻碳电极置于pH=5～7的PBS溶液中进行恒电位还原，还原电位为-1.0～-1.5V，还原时间为360～720s，即得石墨烯修饰电极，室温晾干待用；

步骤三：将步骤二中制得的石墨烯修饰电极置于步骤一得到的溴甲酚紫溶液中进行循环伏安扫描，其中，电位为-1.0～+1.5V，扫描速率为50～100mVs^-1，循环次数为10～15圈，即得溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极；

步骤四：用步骤三制备的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测四种碱基混合溶液的电化学信号，确定四种碱基电化学信号所在的峰位；其中，所述的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测的工作条件如下：温度为22～25℃、脉冲高度为0.01～0.1V，脉冲宽度为0.01～0.1s，电位增量为0.005～0.015V；所述的四种碱基混合溶液由浓度为0.20～200.0μM的鸟嘌呤、浓度为0.20～220.0μM的腺嘌呤、浓度为2.0～700.0μM的胸腺嘧啶、浓度为2.50～650.0μM的胞嘧啶和pH=7.0～7.4、浓度为0.1～0.2M的PBS缓冲液制成；

步骤五：对待测的四种碱基混合液采用进行步骤三制备的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极进行电化学检测，得到鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶随浓度变化的差分脉冲伏安图；然后分别以碱基浓度为横坐标，以电化学检测的电流信号为纵坐标，建立四种DNA碱基电化学信号变化规律图；其中，所述的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测的工作条件如下：温度为22～25℃、脉冲高度为0.01～0.1V，脉冲宽度为0.01～0.1s，电位增量为0.005～0.015V；所述的待测定的四种碱基混合溶液由浓度为0.20～200.0μM的鸟嘌呤、浓度为0.20～220.0μM的腺嘌呤、浓度为2.0～700.0μM的胸腺嘧啶、浓度为2.50～650.0μM的胞嘧啶和pH=7.0～7.4、浓度为0.1～0.2M的PBS缓冲液制成。

2.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤一中所述的氧化石墨烯悬浊液浓度为0.5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤一中所述的溴甲酚紫溶液浓度为2.0×10^-3M。

4.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤二中所述的取5μL步骤一得到的氧化石墨烯悬浊液，滴涂到玻碳电极表面。

5.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤二中所述的氧化石墨烯的还原电位为-1.5V。

6.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤二中所述的氧化石墨烯的还原时间为720s。

7.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤三中所述的聚合溴甲酚紫时所用的扫描速率为100mVs^-1。

8.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤三中所述的聚合溴甲酚紫圈数为15圈。

9.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤四中所述的PBS缓冲液pH=7.4。

10.根据权利要求1所述的一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于步骤五中所述的所述的四种碱基混合溶液由浓度为0.20～50.0μM的鸟嘌呤、浓度为0.20～50.0μM的腺嘌呤、浓度为2.0～200.0μM的胸腺嘧啶、浓度为2.50～100.0μM的胞嘧啶和pH=7.2～7.4、浓度为0.1～0.2M的PBS缓冲液制成。