[发明专利]山羊源奥斯陆莫拉菌及其分子鉴定的特异性片段及应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物学领域，具体涉及山羊源奥斯陆莫拉菌及其分子鉴定的特异性片段，还涉及到所述特异性片段的制备方法及应用。 

背景技术

奥斯陆莫拉菌（Moraxella osloensis）是Henriksen于1967年在奥斯陆发现的，该菌是人和动物粘膜上的正常菌群，主要在机体抵抗力及免疫力降低时，引起肺部和泌尿系统方面的感染，同时可能引起败血症和其他感染。奥斯陆莫拉菌的详细描述参见网站： 

http://www.escience.gov.cn/MetaDataSiteMap/Crawler?resourceId=nongyewei_1544C0001000000596。 

目前，对奥斯陆莫拉菌的研究已取得了一些进展，赵锎从一名女患者血液中分离到一株奥斯陆莫拉菌，并研究了其对青霉素、头孢他啶、头孢曲松、氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、复方磺胺甲恶唑等的耐药性[参见文献：从血液中分离出1株奥斯陆莫拉菌，中华医院感染学杂志，2004，14（10）：1198]。林燕青等从肾盂积水中检出奥斯陆莫拉菌，并对其进行了菌落特征鉴定[参见文献：从肾盂积水中检出奥斯陆莫拉菌1例，中华医院感染学杂志，2004，1（14）：14]。目前，关于奥斯陆莫拉菌对山羊的生理机能危害还未见报道。 

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供了一种山羊源奥斯陆莫拉菌，为今后进一步研究山羊源奥斯陆莫拉菌生理生化特性及其对动物机体的危害奠定了基础；本发明的目的之二在于提供山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段及其制备方法，该特异性片段可以快速检测、鉴定山羊源奥斯陆莫拉菌，所述的制备方法可以特异性扩增得到山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段；本发明的目的之三在于提供山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段的应用，利用该特异片段可以快速鉴定山羊源奥斯陆莫拉菌；本发明的目的之四在于提供检测山羊源奥斯陆莫拉菌的试剂盒，该试剂盒可以快速筛查山羊源奥斯陆莫拉菌。 

为实现上述目的，本发明的技术方案为： 

山羊源奥斯陆莫拉菌，其生物保藏编号为CCTCC M2014036。 

生物保藏信息说明： 

于2014年1月22日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为武昌珞珈山武汉大学校内中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2014036，分类命名为Morexella osloensis FLZ-0127(奥斯陆莫拉菌FLZ-0127)。 

生物保藏编号为CCTCC M2014036的山羊源奥斯陆莫拉菌，是从山羊肺炎病例肺脏化脓部位分离得到。 

进一步，所述的山羊源奥斯陆莫拉菌，所述的分离是将肺脏化脓部位采用无菌划线接种到鲜血琼脂培养基平板上，37℃恒温培养24-48h，分离得到病原菌。 

山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段，序列如SEQ ID NO：1所示。 

山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段的制备方法，包括如下进行的步骤： 

（1）取权利要求2所述的山羊源奥斯陆莫拉菌，提取基因组DNA，制备模 板DNA； 

（2）取步骤（1）中所制备的模板DNA，采用细菌通用引物扩增所述山羊源奥斯陆莫拉菌的16S rDNA，得到山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段；所述的通用引物为：上游引物F27，序列如SEQ ID NO：2所示；下游引物R1492，序列如SEQ ID NO：3所示。 

进一步，所述的制备方法，所述步骤（2）中，采用细菌通用引物进行扩增，PCR反应体系总体积为50μL，含有2×TaqPCR Master Mix25μL，上、下游引物各1μL，模板DNA2μL，余量为水，所述上、下游引物浓度均为50μmol/L。 

进一步，所述的制备方法，所述扩增为在PCR仪中进行扩增，反应条件为94℃预变性4min，94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，72℃延伸10min，结束反应后，所得的PCR产物于4℃保存；采用l0g/L琼脂糖凝胶电泳对所述的PCR产物进行检测，PCR产物序列如SEQ ID NO：1所示。 

所述的山羊源奥斯陆莫拉菌DNA分子鉴定的特异性片段或特异性片段的互补序列片段在检测山羊源奥斯陆莫拉菌中的应用，如作为特异性分子探针检测山羊源奥斯陆莫拉菌。