[发明专利]一种人ICF45单克隆抗体的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种间期细胞质焦点蛋白45（Interphase Cytoplasmic Foci Protein-45,ICF45）单克隆抗体的制备及其应用，尤其涉及一种人ICF45单克隆抗体的制备及应用。

背景技术

ICF45蛋白是发现的一个新的胞质蛋白，其表达具有高度细胞周期时相特异性，在细胞周期调控中发挥重要的作用。前期研究结果显示，ICF45在细胞的间期定位于细胞质，在核膜附近形成1‐2个特异性的点状聚焦，与中心体有细胞周期时相特异性地共定位，而在细胞有丝分裂期消失。

众多研究提示，肿瘤的发生与细胞中心体扩增有关。中心体复制异常，如中心体数目增加等，可引起有丝分裂期产生多级纺锤体及异常染色体分离。稳定沉默ICF45可导致中心体复制异常，出现多极和单极纺锤体，微丝和微管变得相当发达和不规则，导致胞质分裂受阻，出现大量多核细胞或大核细胞。肿瘤细胞模型Hela中发现细胞增殖和附着能力明显削弱。而过表达可抑制某些中心体蛋白的募集。这说明ICF45不仅参与到细胞正常的生理过程，在疾病、肿瘤和变态反应中也起到相应作用，预示ICF45具有重要的生物学功能和意义。

因此，进一步对ICF45蛋白生物学功能的机制研究将成为热点。

发明内容

本发明的目的是提供小鼠杂交瘤细胞（mus musculus hybridoma）。

本发明提供的保藏号为CGMCC No.8659的小鼠杂交瘤细胞（mus musculus hybridoma）F5H1D1H2。

由保藏号为CGMCC No.8659的小鼠杂交瘤细胞（mus musculus hybridoma）F5H1D1H2产生的单克隆抗体也是本发明保护的范围。

上述的单克隆抗体在检测ICF45蛋白中的应用也是本发明保护的范围。

上述的单克隆抗体在检测待测样品是否含有ICF45蛋白中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用中，所述待测样品为过表达ICF45的Hela细胞。

上述的单克隆抗体在制备检测待测样品是否含有ICF45蛋白的试剂盒中的应用也是本发明保护的范围。

含有上述的单克隆抗体的检测待测样品是否含有ICF45蛋白的试剂盒也是本发明保护的范围。

上述的应用或试剂盒中，所述试剂盒为免疫组化检测试剂盒或免疫荧光检测试剂盒。

将能稳定分泌抗ICF45的单克隆抗体的杂交瘤细胞株F5H1D1H2于2013年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.8659，其分类命名为杂交瘤细胞。

本发明的实验证明，本发明筛选得到1株能稳定分泌抗ICF45的单克隆抗体的杂交瘤细胞，并对其进行生物学特性鉴定，以期进一步探讨ICF45的蛋白水平对细胞正常的生理功能的影响，以及为在疾病、肿瘤和变态反应中起到相应作用关系及其功能的深入研究提供依据和奠定基础，制备抑制相应疾病的潜在药物蛋白。

附图说明

图1为ICF45蛋白的SDS-PAGE分析

图2为ICF45蛋白免疫所得血清Western Blot检测（1:2000）

图3为ICF45蛋白免疫所得血清ELISA效价检测

图4为ICF45融合后第二次筛选24孔检测

图5为ICF45第三次克隆筛选阳性孔检测

图6为单抗抗体亚型鉴定

图7为腹水抗体效价的测定

图8为单抗纯度及分子质量鉴定

图9为Western Blot检测内源和外源ICF45的结果

图10为免疫组化检测ICF45（1:200）

图11为免疫荧光检测ICF45（1:200）

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、单克隆抗体的制备

一、杂交瘤细胞株的获得

1、ICF45蛋白的制备

ICF45蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1，核苷酸序列为序列表中的序列2；其全长cDNA序列在NCBI Genebank上的登录号为AY463216。