[发明专利]一种采用樟芝深层发酵技术制备2-苯乙醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于2-苯乙醇的制备领域，特别涉及一种采用樟芝深层发酵技术制备2-苯乙醇的方法。

背景技术

2-苯乙醇因其柔甜的香气而颇受人们欢迎，在日常生产及生活中，2-苯乙醇在日化用品、食品、烟草等工业领域应用广泛。而且还具有增强香气的作用，可以用于调配多种不同的香型。在香料生产领域2-苯乙醇也应用广范，是第二大香料成分，可以调配多种香型的香精和作为食品添加剂使用，增加食品中的香味。在国内外，目前已被应用于医药、化妆品等产业中，而且以其为原料生产的多种衍生物应用价值也非常巨大，如其酯类衍生物-乙酸苯乙酯等，这些衍生物也因其香气似玫瑰且带蜜甜，同样可用于日化和食用香精。

截止到目前，2-苯乙醇基本上都为廉价材料化学合成的，只有很少的是从玫瑰中直接提取的。而化学合成的2-苯乙醇市场价格约为3.5$/kg，天然的2-苯乙醇价格却高达1000$/kg。随着科技的发展，人民物质生活水平的显著提高，健康意识的增强，随之而来的便是食品安全的问题。为了人们的健康，世界各国对于食品加工方面的限制也会更加明确，“绿色”这个字眼也越来越多的出现在我们的视野当中。当前，国际上天然2-苯乙醇的生产，主要集中在法国、德国等发达国家，我国在这方面比较欠缺，需要加强研究。

微生物体积小、繁殖快，吸收快，原料来源广且低，故采用生物-微生物转化法生产“绿色”的2-苯乙醇周期短，效率高，没有其他化合物的干扰等，优点显著，故产品的质量也比较容易达到国际标准。中国专利CN1403581A公开了一种以烟草作为原料，酵母发酵法生产香料苯乙醇的工艺，但该方法使用烟草做原料，有机溶剂萃取后，离子交换树脂纯化获得苯乙醇，是一种新颖的微生物法生产天然苯乙醇的方法，但成本较高，且烟草原料在发酵过程中的潜在的毒素情况并未涉及，而使用廉价、安全的农副产品，通过微生物法获得天然的2-苯乙醇的方法，成为一种迫切需求。

樟芝（Antrodia camphorata）又称牛樟芝、牛樟菇等，属担子菌门，担子菌亚门，担子菌纲，无褶菌目，多孔菌科，台芝属，是台湾特有的药用真菌，主要分布在中国台湾山区。其营养成分丰富，含有多糖、三萜类、固醇类及抗氧化物质等多种生理活性成分，具有保肝、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、解毒、抗炎等多种功效，近年来已成为研究和开发的热点。由于牛樟树被列为珍稀保护树种，而樟芝的固体培养周期也比较长，故樟芝的深层发酵技术越来越为人们所重视。野生樟芝的子实体极少，且资源越发匮乏，而大规模的人工种植还未能真正实现，故液体深层发酵技术，以其可以在短时间内获得大量的菌丝体，且无季节的限制等优点，逐渐成为樟芝培养的主要方法。近十几年，中国台湾、大陆都进行了与之相关的各方面的研究，但大部分的研究主要集中在菌丝体以及菌丝体活性成分方面。工艺过程中一般作为废弃物的发酵滤过液，都倾倒了，但研究发现其中含有香味物质2-苯乙醇，故通过优化培养基条件及发酵条件，提高樟芝发酵液中2-苯乙醇的含量，可以有效的利用发酵液，进行天然2-苯乙醇的生产，在医药、食品、香料工业等方面具有很大的开发利用价值。由于材料安全，成本低亷，可以加入到口香糖、糖果、茶点、软饮料、运动型饮料和奶制品中，也可以用于化妆品中洗发精、肥皂、浴液和牙膏的生产以及香水和除臭剂的生产。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种采用樟芝深层发酵技术制备2-苯乙醇的方法，该方法生产工艺简便，具有广泛的工业化发展前景，发酵培养液过滤后分为菌丝体和发酵液，对发酵液进行萃取后获得2-苯乙醇，发酵菌丝体可用于其它生物学研究，对有效利用农产品副产物、废弃物，对提高食、药用菌产业的附加值和农林资源的综合利用具有重要的意义。

本发明的一种采用樟芝深层发酵技术制备2-苯乙醇的方法，包括：

（1）无菌条件下，将樟芝菌株（ATCC200183）转接到PDA斜面上，26～30℃恒温避光培养12～20d，待菌丝长满斜面后备用，期间转接2-3次；

（2）将上述培养好的斜面菌种切割成菌块（0.2～0.5cm×0.2～0.5cm）接入PD液体培养基(称取200g马铃薯，洗净去皮切片，加水1000mL煮沸15min，纱布过滤后加去离子水补足至1000mL，再加12g葡萄糖，煮沸至固体充分溶解后分装灭菌，得到PD液体培养基)中，150～200rpm、26～30℃摇床恒温培养6～10d；无菌条件下匀浆后，接入新鲜PD液体培养基中，接种量为10%～20%，150～200rpm、26～30℃摇床恒温培养5～8d，即得液体种子液；