[发明专利]具有抑菌活性的螺旋藻多肽P1及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质工程领域，具体地说，涉及一种具有抑菌活性的螺旋藻多肽P1及其应用。

背景技术

螺旋藻(Spirulina)是一类单细胞生物，属于蓝藻门颤藻科。大量研究表明，螺旋藻含有非常丰富的营养成分，蛋白质含量高达50%-70%，氨基酸组成比例非常理想，是一种极好的蛋白质来源。但蛋白质属于大分子物质，遇水膨胀后粘度较大，不利于加工，且也不利于人体对其消化和吸收。对螺旋藻蛋白质进行水解有利于提高蛋白质的溶解性，提高利用率。螺旋藻蛋白水解后形成多肽及小分子肽，能被人体快速吸收。

随着人们的生活水平和安全意识的不断提高，国内外对食品的微生物污染问题十分关注，对食品中的防腐剂要求也越来越高。由于天然防腐剂具有抗菌性强，安全无毒，水溶性好，热稳定性好，作用范围广等特点，这些特点是化学合成的防腐剂无法比拟的。而近几十年来，肽类做为一种新型的天然防腐剂，其研究和应用也在逐渐增多。

以螺旋藻作为制备活性肽的来源，有其独特的优点。螺旋藻生长迅速，生物量大，蛋白质含量高，筛选出的抑菌肽既有防腐作用又能提供营养，对于天然防腐剂的应用与开发和螺旋藻的综合利用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的具有抑菌活性的螺旋藻多肽P1。

本发明的另一目的是提供螺旋藻多肽P1在抑菌方面的应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种具有抑菌活性的螺旋藻多肽P1，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示。

本发明的螺旋藻多肽P1是从钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）中提取出来的一种具有抑菌活性的多肽，多肽氨基酸数目小于20个，无需任何修饰连接，为线性多肽，且人工合成方便。

本发明还提供螺旋藻多肽P1在制备广谱抗菌剂中的应用。

本发明还提供一种抗菌剂，其有效成分为所述螺旋藻多肽P1。

本发明还提供螺旋藻多肽P1在制备防腐剂中的应用。

本发明进一步提供一种防腐剂，其有效成分为所述螺旋藻多肽P1。所述防腐剂为安全无毒的细菌防腐剂。

本发明首次从螺旋藻中提取出具有抑菌活性的多肽P1，实验证明其能够有效抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，且无任何毒副作用，可作为广谱抗菌剂或细菌防腐剂使用，应用前景广阔。

附图说明

图1为本发明螺旋藻多肽P1对革兰氏阳性菌（以金黄色葡萄球菌为例）的抑菌效果。

图2为本发明螺旋藻多肽P1对革兰氏阴性菌（以大肠杆菌为例）的抑菌效果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1螺旋藻蛋白的提取

（1）将适量钝顶螺旋藻干粉溶于蒸馏水中，制成螺旋藻悬浮液，利用超声结合反复冻融法进行破壁处理。

（2）将步骤（1）得到的螺旋藻液离心（-4℃，8000r/min离心20min）收集上清液，将上清液用50%饱和NH4SO4进行盐析纯化。

（3）将步骤（2）盐析后得到的螺旋藻液冷冻离心（10000r/min离心20min），收集沉淀，用浓度为0.005M，pH为6.86的磷酸盐缓冲液溶解，于4℃下透析，透析终点用BaCl2进行检测。脱盐后进行真空冷冻干燥，得到螺旋藻蛋白。

实施例2螺旋藻混合多肽的提取

（1）将实施例1中制备的螺旋藻蛋白进行酶法水解，先使用碱性蛋白酶水解螺旋藻蛋白，酶解条件为：加酶量4300U/g，温度55℃，pH7.0，酶解160min；水解完毕后在85℃水浴中灭活酶15～20min。

（2）将步骤（1）的水解产物用木瓜蛋白进行进一步水解，酶解条件为：酶底比4.5%，温度60℃，pH6.5，酶解210min。水解结束后，于80℃水浴中灭活酶15～20min。

（3）将步骤（2）得到的水解产物在4℃，5000r/min离心20min，收集上清液，冻干得到螺旋藻多肽。

实施例3具有抑菌性的螺旋藻多肽的分离纯化及人工合成

（1）将实施例2中制备的螺旋藻混合多肽进行抑菌实验，采用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为实验菌种，确定其具有抑菌活性。

（2）将步骤（1）的具有抑菌性的混合多肽利用分子筛进行分离纯化，采用葡聚糖凝胶G-25柱层析，得到4个组分，分别对各组分进行抑菌实验，结果表明组分2具有抑菌活性。