[发明专利]鉴别11种鸭病毒病的GeXP检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴别11种鸭病毒病的GeXP检测试剂盒。

背景技术

H5、H7和H9亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭黄病毒、新城疫病毒、减蛋综合征病毒、番鸭呼肠孤病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒是严重危害鸭的11种主要传染性疾病。随着养鸭业的发展，鸭传染性病毒病的发病率也在逐渐升高，已成为限制养鸭业发展的一大重要因素。鉴别诊断这些鸭传染性疾病的传统方法，主要包括病原分离鉴定和血清学试验等，但这些方法常受临床病料新鲜度、污染程度或病程的限制，操作也十分繁琐、费时，对多重混合感染的鉴别诊断就更为困难。近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术已被广泛应用于这些鸭传染病的检测，并建立了多重PCR检测技术，同时检测几种病原，但需几对引物组合在一起同时竞争地扩增，引物之间会产生相互干扰，多增加一对引物，敏感性就越低。PCR产物需通过琼脂糖电泳才可观察结果，该电泳难以区分50bp-100bp以内的条带，一般只可做到2-4重PCR，难以达到高通量的检测。多重荧光PCR一般只检测到3重，由于探针要标记不同发光波长的荧光基团，如标记太多的荧光基团，相互会产生干扰，因此，也只能检测到2-4重。由于在多重PCR反应体系中同时存在几对引物，使得形成复杂引物二聚体的概率大大增加，同时检测的目的基因数量有限（多在2-4个基因），使得多重PCR还达不到高通量快速检测和分析的目的。

GeXP系统(Gene Expression Profiler Genetic Analysis System)是美国Beckman Coulter公司研发的用于研究多基因表达定量分析的平台，由两部分组成：用于设计引物的GeXP eXpression Profiler软件和用于结果分析的GenomeLabTM GeXP Genetic Analysis System毛细管电泳仪，后者可清晰分离出相差7bp以上的相邻扩增片段。GeXP多重PCR扩增采用荧光标记通用引物和特异性嵌合引物（即基因特异性引物5’端连接通用引物序列）相结合引发多重体系扩增。PCR反应之初，先由反向特异性嵌合引物与原始模板结合进行逆转录反应，再由正向特异性嵌合引物合成cDNA的第二链，此后，由正、反向嵌合引物的特异性序列以cDNA为模板启动PCR反应，分别扩增出通用引物的互补序列；再由反应体系中占主导地位的荧光标记通用引物，与其互补序列结合，引发后续扩增,通用引物与反应体系中带有荧光标记的碱基序列互补，PCR产物经GeXP毛细管电泳分离，含有荧光标记的PCR产物经GeXP检测窗口检测，依据检测片段与标准分子片段（DNA Size Standard,DSS）迁移时间计算出扩增片段的长度，荧光信号强度代表该分离片段的扩增含量。GeXP系统可在同一个体系里对多达40个目的基因进行有效分析。

利用GeXP多重基因表达遗传分析系统，建立一种能同时鉴别多种病原体的检测方法和检测试剂盒，关键是设计特异性引物，将多重引物组合，利用通用引物，把多重引物的扩增转化为1对通用引物的扩增，从而达到高通量检测的目的。目前，还没有基于GeXP系统的同时可检测鸭源多种传染性疾病病原体的试剂或试剂盒。

发明内容

本发明的一个目的是提供鉴定或辅助鉴定鸭传染病病原体的GeXP检测引物组。

本发明提供的鉴定或辅助鉴定鸭传染病病原体的GeXP检测引物组，由单独使用的引物对A、引物对B、引物对C、引物对D、引物对E、引物对F、引物对G、引物对H、引物对I、引物对J、引物对K和引物对L组成；

所述引物对A由序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成；

所述引物对B由序列表序列3所示的单链DNA和序列表序列4所示的单链DNA组成；

所述引物对C由序列表序列5所示的单链DNA和序列表序列6所示的单链DNA组成；

所述引物对D由序列表序列7所示的单链DNA和序列表序列8所示的单链DNA组成；

所述引物对E由序列表序列9所示的单链DNA和序列表序列10所示的单链DNA组成；

所述引物对F由序列表序列11所示的单链DNA和序列表序列12所示的单链DNA组成；

所述引物对G由序列表序列13所示的单链DNA和序列表序列14所示的单链DNA组成；

所述引物对H由序列表序列15所示的单链DNA和序列表序列16所示的单链DNA组成；

所述引物对I由序列表序列17所示的单链DNA和序列表序列18所示的单链DNA组成；