[发明专利]一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）双金属纳米多孔材料铂铁（PtFe）的制备

将PtFeAl合金片放到装有0.5 ~ 1.0 mol·L^-1NaOH溶液的小烧杯中，置于恒温水浴中，40 ~ 50℃条件下，放置24 ~ 48 h，将得到的产物用二次水反复洗涤，室温下晾干，即制备出所需的PtFe；

（2）PtFe/辣根过氧化物酶/谷胱甘肽转移酶二抗复合物（PtFe/HRP/Ab₂）制备

将PtFe悬浮液超声，移取悬浮液、HRP溶液和Ab₂溶液于一离心管中，体积比为PtFe: HRP : Ab₂ = 1 : 0.5 ~ 2 : 0.5 ~ 2进行混合，4℃条件下，进行振荡孵化，孵化12 ~ 24 h后，置于4 ℃冰箱中保存待用；

（3）电化学免疫传感器的制备。

2.如权利要求1所述的一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的电化学免疫传感器的制备，步骤如下：

（1）将直径4 mm 的玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05 mm 的三氧化二铝抛光粉抛光处理，乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净，然后将电极置于5 mmol·L^-1铁氰化钾溶液中，在－0.2 ~ 0.6 V电位下扫描，使峰电位差小于80 mV；

（2）将壳聚糖分散的HSO₃-GS修饰于玻碳电极表面，室温干燥；

（3）将谷胱甘肽转移酶一抗（Ab₁）滴涂到步骤（2）HSO₃-GS修饰的电极表面，置于4℃湿润条件下晾干；

（4）将浓度为100 μg·mL^-1牛血清白蛋白滴涂到步骤（3）Ab₁修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干；

（5）将谷胱甘肽转移酶抗原（GST）滴涂在步骤（4）牛血清白蛋白修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干；

（6）将PtFe/HRP/Ab₂滴涂在步骤（5）GST修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干，电化学免疫传感器制备完成。

3.如权利要求1所述的一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法，其特征在于，所述HSO₃-GS的浓度为0.5 ~ 2.5 mg·mL^-1，所述PtFe悬浮液的浓度为10 mg·mL^-1，所述HRP的浓度为1.0 mg·mL^-1，所述Ab₂的浓度为1.0 mg·mL^-1。

4.如权利要求1 ~ 3之一所述的制备方法制备的传感器的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用0.10 mol·mL^-1，pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液，配制在0.01 ~ 12 ng·mL^-1范围内不同浓度的GST溶液，将6 μL不同浓度的GST溶液分别滴涂至权利要求2中步骤（4）牛血清白蛋白修饰的电极表面，晾干后，按照权利要求2中步骤（6）修饰电极，连接至电化学工作站中，分别将电极置于含有2.0 ~ 3.0 mmol·L^-1 天青A和1.0 ~5.0 mmol·L^-1 H₂O₂的pH=7.4的 PBS缓冲溶液中测定其电流变化；

（2）根据所得电流差值与GST浓度呈线性关系，绘制工作曲线；

（3）依据工作曲线的绘制方法进行样品中GST的检测，检测结果从工作曲线中查得。