[发明专利]NO在制备烧伤后创面修复药物中的用途

说明书

技术领域

本发明属于创面修复技术领域，具体涉及NO在制备烧伤后创面修复药物中的用途。 

背景技术

烧创伤是以皮肤损伤为始发因素的特殊类型创伤，其主要问题是创面问题，如何尽早封闭、修复创面是烧伤治疗的根本任务。创面修复是现代医学研究的重要领域，表皮干细胞是皮肤创面自行或生理性愈合的最重要物质基础。现有研究表明，残存、健在的皮肤表皮干细胞在创面的生理性愈合中起着重要作用。残存的表皮干细胞通过脱粘附、离巢迁移、增殖，并向表皮终末细胞分化，形成表皮角质细胞，向创面爬行，进而覆盖创面，最终封闭修复创面。另外研究表明，一氧化氮(NitricOxide,NO)是一种作用众多小分子生物活性介质，参与了多种病理及生理过程。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是烧伤后创面修复提供了一种新选择。 

本发明的技术方案是烧伤后创面修复的药物，其主要成分为NO或NO供体。 

其中，所述的NO供体为SNAP或L-精氨酸。 

进一步的，所述的SNAP的浓度为10～500μmol/L。 

本发明还提供了NO在制备烧伤后创面修复药物中的用途，NO来自于NO供体。 

进一步的，所述的NO供体为SNAP或L-精氨酸。 

其中，SNAP的浓度为10～500μmol/L。 

本发明的有益效果：本发明阐述了一氧化氮对表皮干细胞(ESC)在烧创伤创面中的作用及用途。本发明为创面修复提供了一种新的方法和用途，明确了NO在创面修复中的重要作用。 

附图说明

图1为体外人表皮干细胞培养及鉴定示意图；其中A为原代培养人表皮干细胞第7天时细胞小克隆形成图片，B为原代培养人表皮干细胞培养14天时细胞融合图片，C为角蛋白K19免疫荧光图片，D为β1整合素免疫荧光图片，E为角蛋白K19和β1整合素双染免疫荧光图片； 

图2为NO对体外培养人表皮干细胞迁移的作用示意图；其中图A为不同SNAP浓度在不同时相点细胞在划痕实验中的迁移情况，图B为体外细胞迁移实验采用统计学统计作双因素方差分析结果示意图。 

图3为NO对体外培养人表皮干细胞粘附功能的影响示意图。 

图4为NO对体外培养人表皮干细胞增殖的作用示意图。 

图5为小鼠浅Ⅱ度烫伤及BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）标记在体小鼠表皮干细胞示意图。其中图A为小鼠浅Ⅱ度烫伤示意图，图B为注射BrdU并追踪7周时BrdU阳性细胞在皮肤中的定位（如箭头所示）； 

图6为NO对在体小鼠表皮干细胞迁移的作用示意图。其中图A～D分别为L-NMMA（一氧化氮合酶抑制剂）组、L-Arg（L-精氨酸）组、Gly(甘氨酸)组、NS(生理盐水)组中BrdU标记的表皮干细胞在烫伤中的迁移情况。 

图7为采用专业图像采集分析后各组BrdU标记的表皮干细胞在烫伤中的迁移情况示意图。 

具体实施方式

目前发现，NO在创面愈合过程中的炎症反应、肉芽组织增生及创面重塑中均起着重要作用。它既具有收缩创面、扩张血管、参与炎症反应、抗感染能力，以及促进胶原合成、血管新生、成纤维细胞增殖、增强创面抗张强度等。 

本发明阐述了一氧化氮对表皮干细胞(ESC)在烧创伤创面中的作用及用途。发明人首先建立ESC分离培养体系，并完成ESC鉴定相关研究；再通过NO供体SNAP（S-Nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine）于ESC，研究其相关生物学效应。研究表明，外源性NO对体外培养人ESC具有脱黏附、促增殖作用，以及适宜浓度的外源性NO对体外培养人ESC的迁移功能有促进作用。发明人还建立了表皮干细胞迁移模型，在浅二度烫伤下研究一氧化氮对在体表皮干细胞的作用。在体实验表明，NO通过促进表皮干细胞增殖、迁移方式，促使创面加速愈合。在体研究中需指出：我们所阐述的表皮干细胞的迁移的概念是指表皮干细胞从其固有巢穴发生逐步分化、增殖并最终分化成角质层细胞的过程，即表皮干细胞修复表皮的过程；离体实验研究的是传统意义上的一种物质对一种细胞的作用，而在体研究的是一种物质在表皮干细胞修复表皮的整个过程。由此本发明充分阐述述了NO是通过促进表皮干细胞离巢、脱粘附、增殖，进而迁移至创面，最终促进创面修复这一重要发现。本发明为创面修复提供了一种新的方法和用途，明确了NO在创面修复中的重要作用。 

实施例1一氧化氮对体外培养人表皮干细胞粘附、迁移及增殖功能的作用