[发明专利]与小麦千粒重相关的基因、功能标记及其应用有效
申请号: | 201410033076.4 | 申请日: | 2014-01-24 |
公开(公告)号: | CN103820476A | 公开(公告)日: | 2014-05-28 |
发明(设计)人: | 李斯深;张照贵;赵岩;孔凡美;郭营 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | C12N15/54 | 分类号: | C12N15/54;C12N15/11;C12Q1/68 |
代理公司: | 石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112 | 代理人: | 白海静 |
地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 小麦 千粒重 相关 基因 功能 标记 及其 应用 | ||
1.与小麦千粒重相关的基因TaSnRK2.10,其特征在于,该基因包括TaSnRK2.10-4A、TaSnRK2.10-4B和TaSnRK2.10-4D;其中所述TaSnRK2.10-4A的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示、gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,所述TaSnRK2.10-4B的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示、gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示,所述TaSnRK2.10-4D的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示、gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根据权利要求1所述的与小麦千粒重相关的基因TaSnRK2.10,其特征是在于,扩增TaSnRK2.10基因的引物为TaSnRK2.10-1和TaSnRK2.10-2;其中TaSnRK2.10-1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示; TaSnRK2.10-2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
3.根据权利要求1所述的与小麦千粒重相关的基因TaSnRK2.10,其特征在于,用于TaSnRK2.10基因染色体定位的引物为TaSnRK2.10-4A1,TaSnRK2.10-4B1和TaSnRK2.10-4D1;其中TaSnRK2.10-4A1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示, TaSnRK2.10-4B1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示, TaSnRK2.10-4D1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示。
4.一种与小麦千粒重相关的基因TaSnRK2.10的分子标记,其特征在于,该分子标记为TaSnRK2.10-4A-caps,其分子标记的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示、反向核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
5.一种利用分子标记TaSnRK2.10-4A-caps检测小麦品种千粒重的方法,其特征在于,包括以下步骤:
a.用TaSnTK2.10-4A-caps的标记引物对小麦品种的DNA分别进行PCR扩增,其PCR扩增体系为20 μl,包含H2O 14.3 μl,2×PCR缓冲液2.0 μl,Taq酶0.20 μl,左反向引物各0.5 μl,cDNA 1.0 μl,dNTP 1.5 μl;扩增条件为94℃预变性4 min;94℃变性40 s,58℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min;10℃保存;
b.将上述扩增产物分别用SalI内切酶进行酶切,酶切产物在1%琼脂糖凝胶上电泳分离,如PCR扩增产物被切开大小为793 bp和316 bp的两条带,则该小麦品种属于具有高千粒重纯合体品种;如PCR产物被切开为793 bp和316 bp的带,同时具有未切开的1106 bp大小的带,则该小麦品种属于具有高千粒重的单倍型的杂合体品种;如PCR扩增产物只有一条未切开的大小为1106 bp的带,则该小麦品种属于不具有高千粒重的纯合体品种;其中SalI内切酶体系为20 μl,包含SalI内切酶1 μl,10×缓冲液2 μl,PCP产物17 μl;反应条件为37℃,5 min。
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