[发明专利]一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法

权利要求书

1.一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）树脂对发酵液进行吸附：将纤维堆囊菌在液体培养基中进行发酵，并向液体培养基中加入经过处理的大孔树脂，发酵结束后，过滤得到吸附树脂；其中，大孔树脂的加入量为液体培养基体积的2-5%；

（2）乙酸乙酯浸提：用乙酸乙酯浸提吸附树脂，收集浸提液；

（3）浸提液的初步过滤：将浸提液首先通过孔径为0.2-0.5um的微滤膜过滤，除去残留的菌体，得到滤液；再将滤液采用截留分子量为1000-5000的超滤膜过滤以去除大分子杂质，收集滤液，得到粗提物；

（4）埃博霉素B分子印迹膜过滤：首先将博霉素B分子印迹聚合物膜固定在透过装置的原料池和透过池之间，向原料池中加入粗提物，透过池中加入乙酸乙酯，将透过装置密封，搅拌下进行15-30min后，收集透过液得到埃博霉素B溶液；

（5）结晶：将埃博霉素B溶液进行真空浓缩，得到浓缩液，再将浓缩液于-20～-10℃下进行结晶，得到白色粉末状结晶，即为埃博霉素B。

2.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述的步骤（1）中的液体培养基成分为土豆淀粉2.5～3.0g/L，蔗糖0.7～1.0g/L，葡萄糖0.2～0.5g/L，豆饼粉1.7～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O2.3～2.5g/L，CaCl₂ 3.0～3.5g/L，EDTA-Fe³⁺ 2mL/L，微量元素0.5～1.0mL/L，pH值为7.2；发酵的时间为120-150h。

3.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中纤维堆囊菌菌株号为ATCC25532或ATCC25569。

4.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述的步骤（1）中大孔树脂的采用如下方法进行处理：首先，用3～5倍大孔树脂体积的甲醇浸泡大孔树脂，摇床震荡12-16h后，去除甲醇溶液，水洗至无甲醇味；再用甲醇浸泡12-16h后，水洗至无甲醇味；大孔树脂为XAD-16型大孔树脂。

5.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述步骤（2）中乙酸乙酯的用量为大孔树脂体积的3～5倍，浸提的时间为24-48h。

6.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述步骤（3）中微滤膜与超滤膜的材质均为醋酸纤维素、聚砜、聚丙烯、聚丙烯腈、聚乙烯醇或聚酰胺。

7.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述步骤（3）中微滤膜过滤的操作压力为0.1-0.5Mpa，操作温度为0-40℃，控制流速5-10mL/min；超滤膜过滤的操作压力为0.1-0.6MPa，温度0-40℃，控制流速5-10mL/min。

8.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，所述的埃博霉素B分子印迹聚合物膜是采用如下方法得到的：将埃博霉素B、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按照摩尔比1:4:20混合均匀后，溶解于体积比为4:1的乙醇和甲醇的混合溶液中，搅拌均匀加入偶氮二异丁氰，充N₂反应12h；然后将尼龙微孔滤膜浸泡20min后取出放入两个玻璃片之间，在波长为365nm、功率为400W的紫外灯下照射10h后，将玻璃片分开，用乙酸:甲醇体积比为1:9的溶液清洗掉埃博霉素B，即得到以尼龙微孔滤膜为支撑材料的埃博霉素B分子印迹聚合物膜；其中，所述体积比为4:1的乙醇和甲醇的混合溶液的用量为20～25mL/1mmol埃博霉素B；偶氮二异丁腈与埃博霉素B的比为5mg：1mol。