[发明专利]一种耐碱高温甘露聚糖酶ManB的制备方法及其基因和应用

权利要求书

1.一种耐碱高温甘露聚糖酶ManB的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）、在不改变甘露聚糖酶1BQC的氨基酸序列的条件下，对其进行基因重排和优化密码子，去除毕赤酵母稀有密码子，并提高mRNA的二级结构稳定性，获得优化的甘露聚糖酶ManB基因，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；（2）、将步骤（1）中甘露聚糖酶ManB基因的5'端和3'端位置分别设计EcoR I和Not I酶切位点，完成全基因合成后插入表达载体pPIC9K，构建重组质粒pPIC9K-ManB；（3）将步骤（2）中重组质粒pPIC9K-ManB采用Dra I线性化该重组质粒后，转化毕赤酵母GS115感受态细胞，并筛选获得产酶最高的重组毕赤酵母菌株ManB-GS115；（4）将步骤（3）中重组毕赤酵母菌株ManB-GS115接种于毕赤酵母发酵培养基，并维持甲醇诱导产酶，从而获得甘露聚糖酶ManB。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）和步骤（4）中所述的甘露聚糖酶ManB被分泌至胞外培养液中。

3.权利要求1中所述的优化的甘露聚糖酶ManB基因，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.权利要求1中所述的含有优化的甘露聚糖酶ManB基因的重组表达质粒pPIC9K-ManB。

5.权利要求1所述的重组毕赤酵母菌株ManB-GS115。

6.权利要求1所述的耐碱高温甘露聚糖酶ManB，在饲料、食品、造纸、洗涤和医药中的应用。