[发明专利]出血性大肠杆菌O157:H7免疫PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的免疫PCR检测试剂盒。 

背景技术

出血性大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）是肠道大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播。出血性大肠杆菌O157:H7可引起肠炎，受感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10%的病人可发展成为溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30%以上。世界卫生组织已经将出血性大肠杆菌O157:H7肠炎列为新发传染病。出血性大肠杆菌O157:H7感染已经成为一个世界性的卫生问题。 

目前出血性大肠杆菌O157:H7的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。分子生物学和免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以出血性大肠杆菌O157:H7为检测靶标，所要求保护的技术涉及出血性大肠杆菌O157:H7快速检测产品。 

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测出血性大肠杆菌O157:H7的PCR反应管。 

本发明的另一个目的是提供一种用于检测出血性大肠杆菌O157:H7的免疫PCR检测试剂盒。 

本发明的第一方面是提供了一种用于检测出血性大肠杆菌O157:H7的PCR反应管，所述的PCR反应管包括： 

免疫PCR管；和 

包被于所述的免疫PCR管管体内壁的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，所述的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3，CGMCC No.6610或3A8F11B10E7，CGMCC No.8458产生。 

本发明的第二方面是提供了一种检测试剂盒，所述的试剂盒含有所述的PCR反应管。 

在一优选例中，所述的试剂盒还含有容器a，所述的容器a中装有所述的PCR反应管。 

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有缓冲液、dNTP、TaqDNA聚合酶、ddH₂O、引物、阳性对照和阴性对照。 

在另一优选例中，所述的引物包括正向引物和反向引物。 

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的出血性大肠杆菌O157:H7菌液，所述的阴性对照为灭菌的E.C肉汤。 

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。 

附图说明

图1是本发明的试剂盒的使用流程和原理图。 

图2是出血性大肠杆菌O157:H7直接PCR梯度稀释检测限研究结果。 

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1.04×10⁸～1.04×10cfu/mL。 

图3是出血性大肠杆菌O157:H7免疫PCR检测试剂盒检测出血性大肠杆菌梯度稀释检测限研究结果。 

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1.04×10⁸～1.04×10cfu/mL。 

图4是检测试剂盒特异性的结果。 

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-12号泳道为：出血性大肠杆菌O157:H7ATCC82346，出血性大肠杆菌O157:H7ATCC82346，金黄色葡萄球菌ATCC27660，鼠氏伤寒沙门氏菌ATCC22956，肠炎沙门氏菌ATCC13076，单增李斯特菌ATCC43251，小肠结肠炎耶尔森氏菌ATCC23715，福氏志贺氏菌ATCC12022，宋内氏志贺氏菌ATCC25931，痢疾志贺氏菌ATCC51329，乙型溶血性链球菌ATCC10373，阪崎肠杆菌ATCC29004。 

图5是模拟带菌牛奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。 

A（1）模拟带菌牛奶样品直接PCR检测限研究结果； 

A（2）模拟带菌牛奶样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；