[发明专利]H5N1亚型禽流感与鸭肠炎病毒细菌人工染色体质粒

权利要求书

1.一种H5N1亚型禽流感病毒与鸭肠炎病毒人工染色体质粒pBAC-C-KCE-HA5，其特征在于：在鸭肠炎病毒人工染色体的质粒pBAC-C-KCE中插入H5N1亚型禽流感病毒ha基因的片段，所述的质粒pBAC-C-KCE的基因结构如图7所示，含有质粒pBAC-C-KCE的大肠杆菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2013377，所述人工染色体质粒pBAC-C-KCE-HA5的基因结构见图14所示，其核苷酸序列全长为169,784bp。

2.一种表达H5N1亚型禽流感病毒与鸭肠炎病毒人工染色体质粒pBAC-C-KCE-HA5的大肠杆菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE-HA，其特征在于：该大肠杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2013378，所述质粒pBAC-C-KCE-HA5的基因结构组成如图14所示。

3.一种构建H5N1亚型禽流感病毒与鸭肠炎病毒人工染色体质粒pBAC-C-KCE-HA5的方法，其特征在于该质粒是通过如下步骤制备得到的：

（1）将登录号为GenBank ID:KF263690的鸭肠炎病毒C-KCE的全基因组，通过同源重组的方法插入到BAC质粒上得到鸭肠炎病毒细菌人工染色体质粒pBAC-C-KCE，含有该质粒的大肠杆菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO：M2013377。

（2）将质粒pRThGA改造为pRTHGA1，在pRTHGA1质粒上插入H5N1亚型禽流感病毒ha基因，该基因的登录号为temporary GenBank accession NO:KJ003987，得到重组质粒pRTHGA-HA5，其结构如图11所示；

（3）运用MAGIC的方法将质粒pRTHGA-HA5中的禽流感病毒ha基因插入鸭肠炎病毒细菌人工染色体质粒pBAC-C-KCE中，得到含有禽流感病毒ha基因和鸭肠炎病毒基因的重组质粒pBAC-C-KCE-HA5，其结构见图16所示，核苷酸序列全长为169,784bp；含有重组质粒pBAC-C-KCE-HA5的大肠杆菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE-HA，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M2013378。

4.权利要求1所述的质粒在制备H5N1亚型禽流感病毒与鸭肠炎病毒活载体疫苗中的应用。