[发明专利]灵芝孢子多糖、制备方法和应用

说明书

发明领域

本发明是一种灵芝孢子多糖、制备方法和应用。该水溶性灵芝孢子多糖是一种葡聚糖，分子量700～10000Da，其中分子量2000～4900Da的部分占60～85%。

技术背景

灵芝孢子是担子菌纲多孔菌科赤芝或紫芝的孢子。灵芝孢子呈褐色卵形，一端平截，大小（8.5～11.2）μm×（5.2～6.9）μm，具有双层壁结构。灵芝孢子的化学成分主要有以下几类：蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子等。灵芝孢子中富含多糖和寡糖，但由于其坚韧的双层壁结构，孢子内的活性成分难以释放提取。

常见的孢子多糖提取工艺获得的多糖分子量大、颜色深、杂质含量高。吕龙等人报道了“灵芝孢子粉多糖、生产方法和用途”[ZL03141851.1]，该灵芝孢子多糖是由11个β-1,3连接葡萄糖为主链，主链上有两条β-1,3,6连接葡萄糖分支，两条支链分别是→1)-β-Glcp-(6→1)-α-Glcp和→1)-β-Glcp-(6→1)-α-Glcp-(4→1)-α-Glcp，分子量范围5000-11000Da，而且该发明采用微波软化处理获得灵芝孢子多糖，在实际生产中，由于微波的穿透性问题，限制了微波装置的放大，影响了其工业化，因而一种能替代微波处理获得灵芝孢子多糖的方法更具应用前景。

发明内容

本发明提供一种灵芝孢子多糖、制备方法和用于制备具有抗肿瘤和免疫增强功能的药物和保健品的应用。

本发明是从有机酸或无机酸热处理后的灵芝孢子粉中提取获得的多糖，该多糖为水溶性葡聚糖，分子量在700～10000Da范围内，其中分子量2000～4900Da的部分占60～85%，具有α-Glc（1→、→4)-α-Glcp-(1→、β-Glcp-(1→、→6)-β-Glcp-(1→、→3)-β-Glcp-(1→、→3,6)-β-Glcp-(1→六种连接方式，其摩尔比为1:5:2:3:4:3。

本发明的灵芝孢子多糖具有如下结构式：

其中n=1～2，Glcp为吡喃型葡萄糖，β-Glcp-(1→为β构型的末端葡萄糖，α-Glcp-(1→为α构型的末端葡萄糖，→6)-β-Glcp-(1→为1,6连接的β构型的葡萄糖，→3,6)-β-Glcp-(1→为1,3,6连接的β构型的葡萄糖，→4)-α-Glcp-(1→为1,4连接的α构型的葡萄糖。

该多糖水中溶解度可达到90mg/mL。

针对灵芝孢子多糖难以提取的状况，本发明提供了一种低成本的灵芝孢子多糖的制备方法。采用本方法可规模化生产质量稳定的灵芝孢子多糖。该灵芝孢子多糖可以用于制备具有抗肿瘤和免疫增强功能的药物或保健品。

本发明的目的是通过下述技术方案实现的：

酸在加热条件下穿透灵芝孢子粉双层壁，使孢子壁上形成许多微孔，酸溶液进入微孔降解孢子粉内部大分子多糖，降解后的多糖分子量降低、水溶性增加，水溶性多糖类成分可通过微孔释放，再用水提醇沉的方法提取和纯化灵芝孢子多糖。

具体方法通过如下的步骤1）、3）或2）、3）方法获得：

1）取灵芝孢子粉加入0.1～2mol/L的无机酸水溶液中搅拌，灵芝孢子粉与无机酸水溶液的质量体积比为100～800克/升，无机酸水溶液60～100℃搅拌10分钟至4小时，反应结束后加无机碱中和至PH5～7.5，减压蒸干溶剂得到酸处理孢子粉；

2）取灵芝孢子粉加入50～100%的有机酸或有机酸水溶液中搅拌，灵芝孢子粉与有机酸或有机酸水溶液的质量体积比为100～800克/升，有机酸或有机酸水溶液60℃至回流反应10分钟至4小时，减压蒸干溶剂得到酸处理孢子粉；

3）将酸处理孢子粉用水浸泡，灵芝孢子粉与水的重量比1:6～15，浸泡时间2～24小时，浸泡液浓缩或不经浓缩，加入3～8倍体积与水互溶的有机溶剂沉淀，沉淀用水溶解，离心上清液浓缩干燥；

上述的方法可以进一步描述如下：

方法一：

（1）取灵芝孢子粉加入60～100℃的无机酸水溶液中搅拌10分钟至4小时，灵芝孢子粉与无机酸水溶液的质量体积比为100～800克/升，无机酸在水溶液中的浓度为0.1～2mol/L，反应结束后加无机碱中和至PH5～7.5，随后减压蒸干得到酸处理孢子粉。

（2）将步骤（1）得到的酸处理孢子粉加入水中浸泡2～24小时，孢子粉与水的质量比为1：6～15，浸泡液浓缩或不浓缩，加入3～8倍体积与水互溶的有机溶剂沉淀，沉淀用水溶解，离心取上清液浓缩干燥。

方法二：