[发明专利]免疫增强的人乳头瘤病毒感染及相关疾病的治疗性疫苗

说明书

技术领域

本发明属于疫苗领域，具体涉及一种人乳头瘤病毒持续性感染及其所诱发的宫颈癌及其它病变的治疗性疫苗，更具体的，涉及含有免疫增强剂的人乳头瘤病毒治疗性疫苗。

背景技术

世界范围内，宫颈癌是女性第二大高发癌症，每年约274,000患者死于该病。所有的宫颈癌均可检出HPV感染。此外，肛门、阴道、阴茎癌及某些口腔癌及喉癌也与HPV感染有关。虽然目前已经有两种预防性疫苗投放市场，但其对已存在的HPV感染并无任何治疗效果，更无法阻断病变恶性化进程。并且，据估算现已被HPV感染的病人基数很大，所以通过大规模接种预防性疫苗达到减少宫颈癌发病率，至少需要20年后才能明显见效。由于已有大量人群感染病毒甚至已发生宫颈癌或癌前病变，因此以清除已被感染的细胞和癌细胞为目的的治疗性疫苗的研发非常迫切。人乳头瘤病毒E6和E7蛋白是HPV病毒携带的二个致癌基因所编码的癌蛋白，属非自体的外源蛋白抗原，从癌前病变到宫颈癌发生它们都持续稳定表达，因此是非常理想的免疫治疗靶点。大量临床研究都试图以这两种癌蛋白为靶点，包括重组病毒、多肽、蛋白和DNA疫苗。这些治疗性疫苗都显示了很好的安全性，在某些病人身上也出现了病灶的消退和生存期延长。此外，研究表明疫苗免疫所诱发的T细胞免疫强度与治疗治疗效果有关。尽管某些临床研究已经出现希望，但如果想彻底治愈持续感染和清除癌症，还需要新的策略来诱导足以强大的抗肿瘤特异性抗原的T细胞免疫反应。

热休克蛋白（HSP）可以有效地调节细胞功能，增强免疫反应。首先，它可以作为“分子伴侣”起作用，帮助蛋白运输定位和辅助蛋白折叠。其次，它可以活化专职抗原递呈细胞（APC），而HSP70可以与巨噬细胞上的受体结合，从而有效激活其免疫反应。SGN-00101是一种融合有HPV16型E7蛋白和结核杆菌的HSP65的融合蛋白，其已经表现出了良好的安全性，并且对抑制宫颈上皮细胞的高度不典型增生有一定效果。

粒-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）是已被广泛研究并被认为是最有效的免疫治疗因子之一。它可以介导自然杀伤细胞和通过抗原提呈细胞来活化肿瘤特异的CD8⁺杀伤性T淋巴细胞，从而起到抗肿瘤作用。诸多动物和临床试验已经证实其可以长期有效激发肿瘤抑制免疫反应。例如，Sipuleucel-T作为一种免疫治疗药物，就是利用了GM-CSF活化抗原递呈细胞的特点，现在已经被美国食品药品安全管理局批准上市。Jennerex等人的最新临床研究也表明表达有GM-CSF的融癌痘苗病毒可以减小多种癌症病灶。但这些增强免疫的方法其疗效都不理想，要么缺乏肿瘤抗原特异性，要么免疫刺激强度欠佳。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种免疫增强的人乳头瘤病毒感染及相关疾病的治疗性疫苗。

首先，本发明提供一种人乳头瘤病毒及免疫增强分子五基因型融合抗原，其含有人乳头瘤病毒16型的E6、E7蛋白和人乳头瘤病毒18型的E6、E7蛋白及免疫增强分子佐剂蛋白。

本发明采用多价抗原线性排列的方式，对融合蛋白的T细胞表位未有影响。在治疗疫苗中起中心作用的是T细胞免疫反应，而T细胞抗原决定簇在递呈过程中被降解成线性短肽，而识别位点一般仅有大约8个氨基酸，所以各种抗原排列顺序也对免疫激发没有实质影响。本发明我们融合了HPV16及18型的4抗原蛋白与热休克蛋白分子，融合更多HPV抗原有更大的优势：可以提供更多的潜在抗原决定簇，增强抗原的递呈及增加免疫反应，对更多不同基因型的HPV感染起作用。从而有效的提高潜在的疫苗免疫的受益人群；并且更大的蛋白更容易被降解提成，从而激发更强的免疫反应。

在本发明一个实施方案中，所述的融合抗原具有下述一或多个突变位点，其中，所述的人乳头瘤病毒16型E6蛋白的突变位点为：121位的谷氨酸突变为甘氨酸；122位的赖氨酸突变为甘氨酸；所述的人乳头瘤病毒16型E7蛋白的突变位点为：24位的半胱氨酸突变为甘氨酸；26位的谷氨酸突变为甘氨酸；所述的人乳头瘤病毒18型E6蛋白的突变位点为：116位的谷氨酸突变为甘氨酸；117位的赖氨酸突变为甘氨酸；所述的人乳头瘤病毒18型E7蛋白的突变位点为：27位的半胱氨酸突变为甘氨酸；29位的谷氨酸突变为甘氨酸。