[发明专利]一种催化灯标及其制备方法以及用催化灯标测定痕量铀的方法

权利要求书

1.用于测定痕量铀的催化灯标，由DNA酶和底物DNA两部分杂交形成，DNA酶序列的3’末端为连续的4个鸟嘌呤脱氧核苷酸（G），底物DNA的序列中间具有一个腺嘌呤核苷酸（rA），底物DNA的5’末端用4-甲基-6-羧基罗丹明（TAMRA）荧光染料修饰。

2.根据权利要求1所述的催化灯标，其特征在于：所述DNA酶的核苷酸序列由序列表中序列1表示，所述底物DNA的核苷酸序列由序列表中序列2表示。

3.根据权利要求1或2所述的催化灯标，其特征在于：DNA酶和底物DNA杂交比例为1.5:1（摩尔质量比）。

4.权利要求1-3任一所述催化灯标的制备方法，其特征在于，将DNA酶和底物DNA以1.5:1的比例（摩尔质量比）混匀后于沸水浴中反应2-10分钟，然后在1-2小时内逐渐冷却至15-25℃，最后放入0-10℃冰箱中冷藏至少30分钟，使DNA酶与底物DNA充分杂交，得到催化灯标；优选沸水浴中反应5分钟，冷却至20℃后在4℃冷藏。

5.一种用权利要求1-3任一所述催化灯标或权利要求4制备方法得到的催化灯标进行痕量铀的测定方法，将DNA酶与底物DNA混合杂交形成的催化灯标，加入到待测样品体系中反应，测定已知浓度硝酸铀酰离子的荧光强度和样品的荧光强度并计算得到样品中的铀含量。

6.根据权利要求5所述痕量铀的测定方法，其特征在于：

1）、测定反应体系中已知浓度硝酸铀酰离子的荧光强度，绘制标准曲线；

2）、测定样品反应体系中的荧光强度ΔI_F；

3）、用算式c_(UO2)2+=（ΔI_F-83.67）/3.41计算样品中铀含量c_(UO2)2+。

7.根据权利要求6所述痕量铀的测定方法，其特征在于：所述反应体系中包括：40微升50mmol/L2-(N-吗啡啉)乙磺酸（MES）缓冲溶液（pH5.5）、40微升1.6×10^-7mol/L催化灯标、80微升2mol/L NaCl溶液、40微升已知浓度的硝酸铀酰离子溶液或样品溶液、以及200微升二次蒸馏水；反应温度15-25℃（优选20℃），反应时间5-15分钟（优选10分钟），以加入100微升50mmol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲溶液（pH8.0）终止反应。

8.根据权利要求5至7任一所述痕量铀的测定方法，其特征在于：荧光强度的测定采用F-7000荧光分光光度计，并设定仪器参数为：激发波长：525nm；发射波长：550-700nm；电压：700V；狭缝：10nm。

9.根据权利要求8所述痕量铀的测定方法，其特征在于：绘制标准曲线中已知浓度硝酸铀酰离子溶液浓度范围为1.121-112.1nmol/L。

10.根据权利要求7或8或9所述痕量铀的测定方法，其特征在于：

50mmol/L2-(N-吗啡啉)乙磺酸（MES）缓冲溶液（pH5.5）配制过程为：准确称取0.4880g的MES固体粉末，溶解于二次蒸馏水中，用1mol/L NaOH调pH至5.5，定容至50.0mL；

50mmol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲溶液（pH8.0）配制过程为：准确称取0.3028g Tris碱、24.0500g尿素，加水溶解后加入10.0mL2mol/L EDTA，然后用浓盐酸调pH至8.0，定容至100mL。