[发明专利]一种革耳菌发酵产漆酶的培养基及产漆酶的方法

说明书

技术领域

本发明属于真菌培养产漆酶的技术领域，具体涉及一株产漆酶的真菌发酵培养基及工艺。更具体的说地，本发明涉及一种革耳发酵产生漆酶的培养基及方法。

背景技术

漆酶（Laccase）是一种含铜的多酚氧化酶，能够氧化多种酚类和芳胺类化合物，并同时将氧分子还原为水。漆酶能够直接作用于木质素，氧化降解酚型木质素结构单元，在某些能够传递电子的小分子介体存在条件下，可以对非酚型的木质素结构单元起到氧化降解的作用。因此漆酶在纸浆生物漂白、工业废水处理、有机染料脱色和高分子催化合成等方面，表现出了很大的研究价值和应用潜力，漆酶被认为是制浆造纸工业中最具有发展前景的酶。

目前,虽然人们对真菌产酶机制有较多了解，但与实际需要相比，多数试验菌株在人工和天然培养基上生长时合成漆酶产量偏低。且真菌培养时培养周期长，极易被污染，有的需要有毒的芳香类化合物的诱导，产酶活力不稳定且相对都比较低，这就导致漆酶的工业化生产很难实现。因此筛选得到高漆酶的菌株，对于开发漆酶的工业化生产具有很重要的促进作用。

野生革耳(Panus rudis)是新发现的一种能生产组成型漆酶的白腐真菌，该菌属于担子菌纲（Basidiomycetes）、同担子亚纲（Homobasidiomycetes）、伞菌目（Agaricales）、侧耳科（Pleurotaceae）、革耳属（Panus），同时该菌产生的漆酶具有较好的热稳定性，是一种极具研究价值和开发潜力的真菌漆酶。

发明内容

本发明的目的在于提供一种革耳菌(Panus rudis)FG-35发酵生产漆酶的培养基及方法，该培养基及配套的方法能够高效产漆酶，应用前景广阔。

一种革耳菌发酵产漆酶的培养基配方：可溶性淀粉5-15g/L、蛋白胨0.2-0.5g/L、K₂HPO₄ 0.5-1.0g/L、KH₂PO₄ 0.5-1.0g/L、ZnSO₄·7H₂O 0.005-0.03g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2-0.5g/L、CuSO₄·7H₂O 0.01-0.07g/L、FeSO₄·7H₂O 0.005-0.010g/L、MnSO₄ 0.005-0.2g/L、CaCl₂ 0.002-0.4g/L、VB1 0.05-0.4g/L、吐温-40 0.2-1.0%，藜芦醇0.05-0.5g/L，培养基的pH=6.8-7.0；所述的革耳菌(Panus rudis)FG-35，保藏号为：CCTCC NO：M2013106。

所述培养基配方优选：可溶性淀粉10.04g/L、蛋白胨0.2g/L、K₂HPO₄ 0.50g/L、KH₂PO₄ 0.50g/L、ZnSO₄·7H₂O 0.01g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、CuSO₄·7H₂O 0.01g/L、FeSO₄·7H₂O 0.005g/L、MnSO₄ 0.07g/L、CaCl₂ 0.08g/L、VB₁ 0.1g/L、吐温-40 0.4%，藜芦醇0.05g/L，培养基的pH=6.8。

一种革耳菌发酵生产漆酶的方法，包含以下步骤：

（a）将保藏号为CCTCC NO：M2013106的革耳菌(Panus rudis)FG-35接种于种子培养基，制得发酵种子液；

(b)将步骤（a）中制得的发酵种子液接种于权利要求1或2所述的培养基中，300mL的三角瓶装液量为50-90mL,接入2×10⁶-5×10⁶个菌种孢子，于28-32℃，转速160-180r/min下培养4-6d。

所述的种子培养基配方：按1L培养基的重量计算，含有15%土豆汁、葡萄糖1%、酒石酸铵0.2%，pH自然；种子在28-32℃、160r/min恒温震荡培养4d得发酵种子液。