[发明专利]一种双头菌及其生产L(+)-酒石酸或其盐的方法

权利要求书

1.一种双头菌菌株，其特征在于: 所述双头菌菌株的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示, 所述双头菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为CGMCC No.7396，命名为：双头菌(Labrys sp.)BK-8，保藏日：2013年4月1日。

2.根据权利要求1所述的一种双头菌菌株在制备L(+)-酒石酸或其盐中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过以下步骤实现：将保存于斜面培养基上的双头菌BK-8 CGMCC No.7396接种于装有30ml种子培养基的250ml三角瓶中，30℃、200rpm振荡培养24h，得到所述双头菌菌株的种子液；然后取10ml上述双头菌的种子液接种于装有200ml产酶培养基的1000ml三角瓶中，30℃、200rpm振荡培养24h，获得相应的双头菌细胞；接着8000rpm、30min离心收集双头菌细胞，将该双头菌细胞加入到200ml的浓度为1M的顺式环氧琥珀酸或其盐中，30℃振荡培养，反应72 h，得到转化液；最后向转化液中加入过量的CaCl₂，形成酒石酸钙沉淀，过滤得到沉淀并水洗，再对酒石酸钙依次进行硫酸酸解、阴、阳离子交换柱精制、浓缩、结晶、分离和烘干得到L(+)-酒石酸或其盐成品。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所用的斜面培养基组成为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠 10g，琼脂粉15g，加水至1000ml，pH7.5；

种子培养基组成为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠 10g，加水至1000ml，pH7.5；

产酶培养基的组成为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠 10g，顺式环氧琥珀酸钠 17.6g，加水至1000ml，pH7.5。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，顺式环氧琥珀酸盐选用顺式环氧琥珀酸钠或顺式环氧琥珀酸钾。

6.根据权利要求1所述的一种双头菌菌株的制备方法，其特征在于，通过以下步骤获得：称取1 g田园土样品，置于装有25 ml筛选培养基的250 ml三角瓶中，30℃、250 rpm下振荡培养4天，取一环培养液，并在固体筛选培养基平板上划斜线，30℃倒置培养3天，挑取平板上的单菌落，接种于装有50 ml产酶培养基的250 ml三角瓶中，30℃、250 rpm下振荡培养36 h，8000 rpm下离心30 min，收集细胞，于4℃放置备用，将离心收集的细胞用10 ml 1 M pH8.0顺式环氧琥珀酸钠悬浮，30℃振荡反应3天后，用偏钒酸铵显色法鉴定反应液中有无酒石酸产生；其中产酶培养基的组成同权利要求4所述。

7.根据权利要求6所述的一种双头菌菌株的制备方法，其特征在于，筛选培养基为：顺式环氧琥珀酸钠 10g，酵母提取物1g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾 2g，加水至1000ml，pH7.5。