[发明专利]一种抗人DAB2IP的单克隆抗体及其细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，具体涉及的是一种抗人肿瘤抑制因子DAB2IP的抗体。本发明还涉及生产该单克隆抗体的细胞株及其制备方法。 

背景技术

DAB2IP（DOC2／DAB2interaction protein）是一种新发现的肿瘤抑制基因，为Ras GTPase-activating protein（Ras GAP）家族的新成员。它与DAB2／DOC2蛋白的N末端相结合，是DAB2信号途径的下游效应器，而DAB2是一个重要的肿瘤抑制基因，在肿瘤的发生中发挥重要作用，并在多种肿瘤中低或缺失表达。DAB2IP作为一种新的GTPase激活蛋白，是Ras和肿瘤坏死因子介导的凋亡通路等多条信号通路中的重要环节，并且参与多种基因表达调节以及细胞的生长调控，因而具有功能多样性。研究发现DAB2IP基因在多个信号通路中都与肿瘤发生密切相关，通过Ras-Erk途径，Ask1-Jnk途径和PI3K-Akt途径等来控制细胞的增值、扩散、凋亡和生存。 

DAB2IP在体内的表达变化与多种肿瘤的发生发展以及转移密切相关，因而倍受人们的关注。该基因的低表达可见于前列腺癌、乳腺癌、胃肠肿瘤、肺癌、肝癌、子宫内膜癌、膀胱移形细胞癌等多种肿瘤中。在DAB2IP与各种肿瘤的关系中，研究最早、最多的当属其与前列腺癌发生发展的关系。Chen等发现人正常前列腺上皮细胞有DAB2IP基因表达，而在前列腺癌细胞DAB2IP基因表达缺失或下调，转染DAB2IP基因后前列腺癌细胞停止生长。还有人发现DAB2IP基因的降低可引起前列腺上皮中致癌基因Skp2的升高，引发肿瘤生长，而在正常的细胞中，DAB2IP基因会抑制致癌基因Skp2的表达。另外，研究表明DAB2IP基因的表达与前列腺癌的分级和预测预后呈负相关，故将DAB21P的低表达用于前列腺癌的预测和诊治中有重要意义。Dote等发现DAB2IP的基因沉默对胃肠癌和乳腺癌的发生起重要作用。Yano等认为DAB2IP可作为肺癌发生的一个生物标 志物。 

以上研究表明该基因在多种肿瘤的发生、发展和预后等方面都发挥了举足轻重的作用。DAB2IP可能提供预兆的生物标记和潜在的治疗癌症转移的靶点，将DAB2IP的低表达用于癌症的早期诊断和治疗中具有很好的前景。因此有效准确的检测DAB2IP成为一项关键的技术，而制备该蛋白特异性的单克隆抗体更成为一种迫切的需要，意义重大。 

吴建祥等公开了“蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制”（浙江农业大学学报,1999,25(2):147-150），其全文引入本文作为参考。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的的单克隆抗体。 

本发明的另一目的是提供一种制备上述单克隆抗体杂交瘤细胞株的方法。 

本发明的再一目的是提供一种上述单克隆抗体在DAB2IP检测中的应用。 

本发明通过如下技术方案实现： 

一种抗DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC No.C2013148，保藏时间为2013年10月23日，保藏名称为杂交瘤细胞株DAB2IPMab1。 

经鉴定此抗体为IgG1亚类（中国典型培养物保藏中心地址：中国湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，邮编：430072）。 

本发明还提供了一种制备上述杂交瘤细胞株的方法，其特征在于，所述方法包括：将DAB2IP基因（SEQ ID NO.1）重组表达，得到DAB2IP蛋白（SEQ ID NO.2），利用该蛋白免疫动物，再经细胞融合得到可以分泌DAB2IP单克隆抗体的细胞株。所述动物是能够制备抗体的动物，优选哺乳动物，例如兔，小鼠，大鼠等。 

在一个具体的实施方案中，所述制备上述杂交瘤细胞株的方法包括，将DAB2IP基因（SEQ ID NO.1）重组到改造过的pET32a载体上，该载体同时含有6Histag和TRX tag，并在6His tag和多克隆位点之间含有TEV酶切位点；将重组质粒在大肠杆菌BL21菌株中进行表达，所表达的蛋白为TRX-6His-DAB2IP（SEQ ID NO.2）融合蛋白，经TEV酶（S219V）切及二次镍柱和分子筛纯化，得到纯化的 DAB2IP（SEQ ID NO.1）蛋白，利用该蛋白免疫小鼠，再经细胞融合及亚克隆化得到单克隆抗体杂交瘤细胞株。 

本发明还提供了一种由上述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。