[发明专利]一种天然6-羟基犬尿喹啉酸提取物的制备方法及其应用

说明书

(一)技术领域：本发明涉及天然植物提取物，具体涉及从银杏叶提取物生产废水中分离制备天然6-羟基犬尿喹啉酸提取物的方法及其应用。 

(二)背景技术：银杏叶及其提取物中含有含量丰富的有机酸，其在银杏标准提取物EGb761中的含量达13%。银杏有机酸类成分可以分为两大类，非酚酸和酚酸，前者包括抗坏血酸、D-葡萄糖酸、奎尼酸和莽草酸；后者包括原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸以及绿原酸。除了上述这些常见的酚酸外，还有一种罕见的含氮酚酸，叫做6-羟基犬尿喹啉酸（6-hydroxykynurenic acid，6-HKA）。6-HKA是犬尿烯酸的衍生物，与犬尿烯酸一样，都是谷氨酸受体拮抗剂，具有很好保护神经细胞的作用。截至目前，6-HKA还未被列入银杏叶及其制剂的质量标准。 

但随着银杏产业的不断发展和科学技术的进步，银杏叶及其制剂中各成分的分离纯化及其药理药效研究越来越多，高效地分离制定银杏叶提取物中的有效成分已成为目前研发的主流方向，尤其是银杏黄酮、银杏内酯、银杏酚酸的分离提取。目前大部分文献关于6-HKA的报道主要集中在合成、分离鉴定，但6-HKA的合成率非常低，两步法合成率也仅为8.2%。因此，从植物中提取制备高含量的6-HKA成为6-HKA的主要来源，但目前关于6-HKA提取制备的报道较少。By P.K.MACNICOL测定了烟草各植物部位的6-HKA含量，结果显示烟草叶中6-HKA含量最高；Grasel等从银杏叶和银杏叶提取物中分离6-HKA，其先后采用二氯甲烷脱脂、70%甲醇提取，减压浓缩后的溶液用强阳离子交换树脂吸附，以70%甲醇先除杂，再用10%的NH₄OH洗脱，重结晶，最后通过活性炭脱色得到6-HKA提取物；该工艺制备的6-HKA粗产品和纯净物的转移率分别是82%、49.5%。上述工艺用到了二氯甲烷、甲醇、氨水等有毒溶剂，不管是制备过程中的安全性还是后续三废的处理，都存在较大的问题；更重要的是，该工艺直接采用银杏叶提取6-HKA，其银杏黄酮、银杏内酯等成分都在制备过程中损失。CN102133243A公开了一种制备银杏叶提取物的工艺，该银杏叶提取物中含有3-4.5%的6-HKA。 

中国药典中银杏叶提取物的制备方法为稀乙醇提取后，用大孔树脂进行纯化，但 6-HKA是一种极性很大的小分子化合物，在中国药典的银杏叶提取物生产过程中大量流失。经技术人员对银杏叶提取物生产工艺过程监测，结果绝大部分6-HK损失在树脂水洗过程，即6-HKA存在于生产废水中。因此，找到一种从银杏叶提取物生产废水中分离制备高含量6-HKA提取物的方法，对于银杏叶资源的综合利用及银杏产业的进一步发展意义重大。 

(三)发明内容：本发明的目的在于提供一种高含量的天然6-HKA提取物，以及从银杏叶提取物生产过程中产生的废水中分离制备天然6-羟基犬尿喹啉酸提取物（6-HKA）的方法，还提供所制备的天然6-HKA提取物在制备食品、保健食品或药品的应用。 

其中，6-HKA提取物中含有50～90%（w/w）的天然6-HKA。以银杏叶提取物产生的废水为原料，上聚酰胺树脂、乙醇溶液洗脱、洗脱液浓缩后重结晶，得到6-HKA提取物，其中天然6-HKA的重量百分比含量为50～90%，具体制备步骤如下： 

1）将依据中国药典制备的银杏叶提取物生产过程中产生的大孔树脂水洗液废水（即银杏叶提取物生产废水），上聚酰胺树脂，用含0～0.2%（v/v）盐酸的30～90%（v/v）浓度乙醇溶液进行洗脱分离，获得洗脱液； 

2）洗脱液回收乙醇，浓缩得浓缩液，浓缩液在常温下的相对密度为1.05～1.25； 

3）浓缩液用酸调pH至酸性，过滤得结晶； 

4）所得结晶干燥后，得6-HKA提取物，其纯度为重量比50～90%。 

本发明所述的银杏叶提取物生产废水为依照《中国药典》制备银杏叶提取物的生产废水，主要成分为单糖、双糖、多糖、氨基酸等大极性物质，6-HKA的含量为0.1～0.3%（w/w）。 

本发明所制备的6-HKA提取物复配到依据《中国药典》制备的银杏叶提取物中，提高银杏叶提取物中6-HKA的含量，增强银杏叶提取物的活血化瘀通络功效。 

本发明制备方法中： 

步骤1）中，大孔树脂水洗液废水上聚酰胺树脂，先用含0～0.02%（v/v）盐酸的水溶液除杂，再用含0～0.2%（v/v）盐酸的乙醇溶液洗脱分离，其中，乙醇溶液的浓度为30～90%（v/v）。