[发明专利]早期结直肠腺癌miRNAs特异表达谱及诊断模型

说明书

技术领域

本发明涉及早期结直肠腺癌miRNAs特异表达谱，以及其逆转录引物和检测引物，以及诊断模型，属于医学诊断技术领域。

背景技术

结直肠腺癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。结直肠腺癌患者的预后取决于其诊断时所处的疾病阶段，据统计，无侵袭转移的结直肠腺患者的5年生存率可高达90%，有局部转移者的5年生存率约68%，而远处转移者的5年生存率则仅约11%。因此早期发现结直肠腺癌是改善患者预后、降低死亡率的关键。

目前用于结直肠腺癌的诊断方法主要包括：CT和MRI、电子肠镜和血清CEA。CT和MRI等对于小于1cm的病灶无法早期诊断，不能用于结直肠腺癌的早期诊断；电子肠镜检查虽被推荐为诊断结直肠腺癌最可靠的方法，但却是有创检查，一定程度上增加了病人的痛苦，且价格昂贵，限制了其在大规模筛查中的应用；肿瘤标志物以其简便、经济、非侵入性等特点日益受到关注。但是，目前临床上推荐用于结直肠腺癌诊断和预后判断的肿瘤标志物只有CEA，而CEA作为肿瘤标志物其敏感性和特异性在结直肠腺癌诊断中的应用也备受质疑。目前的结直肠腺癌肿瘤标志物远远不能满足临床需求，因此，寻找敏感性特异性更高的用于早期诊断结直肠腺癌的肿瘤标志物是临床亟待解决的难题。

MicroRNA(miRNAs)是一类分布广泛的非编码蛋白质的单链小分子RNAs，其通过对mRNA降解或抑制其翻译，在转录后对靶基因的表达水平进行调节，从而参与细胞分化、生长、凋亡、代谢等功能。研究表明，机体内组织、器官的代谢异常或器质性病变可能导致特定疾病状态下某些循环miRNAs表达水平的升高或降低。近年来发现血清中存在大量丰富且稳定的miRNAs，通过对肿瘤患者血清中miRNAs表达谱与对照组进行对比分析，发现不同肿瘤中具有特定的表达谱，为肿瘤的无创性早期诊断提供了一条新的途径。因此，确定结直肠腺癌miRNAs表达谱，筛选差异表达的miRNAs，建立血清miRNAs诊断模型，有助于实现对结直肠腺癌的早期诊断。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了早期结直肠腺癌的miRNAs特异表达谱，以及其逆转录引物和检测引物、检测试剂盒，以及诊断模型。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种早期结直肠腺癌miRNAs特异表达谱，由上调表达的miR-19a-3p，miR-92a-3p，miR-223-3p，以及下调表达的miR-422a构成。

所述miRNAs来自外周静脉血的血清。

所述早期结直肠腺癌miRNAs特异表达谱中特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物，如下：

（1）miR-19a-3p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQ ID NO：1所示，前向检测引物的序列如SEQ ID NO：2所示：

SEQ ID NO：1：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAGTTTT-3’；

SEQ ID NO：2：5’-ACACTCCAGCTGGGTGTGCAAATCTATGCAA-3’；

（2）miR-92a-3p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQ ID NO：3所示，前向检测引物的序列如SEQ ID NO：4所示：

SEQ ID NO：3：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGGCCG-3’；

SEQ ID NO：4：5’-ACACTCCAGCTGGGTATTGCACTTGTCCCG-3’；

（3）miR-223-3p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQ ID NO：5所示，前向检测引物的序列如SEQ ID NO：6所示：

SEQ ID NO：5：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGGGGTAT-3’；

SEQ ID NO：6：5’-ACACTCCAGCTGGGTGTCAGTTTGTCAAAT-3’；

（4）miR-422a的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQ ID NO：7所示，前向检测引物的序列如SEQ ID NO：8所示：

SEQ ID NO：7：