[发明专利]一种响应面法优化的酸性乙醇溶液提取桑叶中1-脱氧野尻霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取1-脱氧野尻霉素的方法，具体涉及一种响应面法优化的稀酸乙醇提取桑叶中1-脱氧野尻霉素的方法，属于植物提取技术领域。 

背景技术

桑叶1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)是从桑树(Morus alba L.)中发现的一种天然哌啶类小分子水溶性生物碱，分子量为163.7。作为强效的糖代谢酶抑制剂(比如α-葡萄糖苷酶、己糖激酶、葡萄糖醛酸酶和糖原磷酸酶等)，DNJ可显著延缓多糖的降解过程，可降低餐后血糖的峰值，稳定空腹血糖。此外，DNJ还有胰岛素增敏的作用，改善胰岛素抵抗。 

桑叶1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)属于哌啶类小分子水溶性生物碱，因此现有文献多以去离子水提取法、溶剂提取法和酸提取法，而且提取效率低、成本高。溶剂提取主要采用乙酸乙酯、乙醇和石油醚等溶剂分部提取；而酸提取法主要采用稀盐酸和稀硫酸提取桑叶中的1-脱氧野尻霉素。文件CN102675188A中公开乙醇提取率(1-脱氧野尻霉素的提取量×100％／所用桑组织的质量)为0.00139％，蒸馏水提取法提取率0.00121％，稀酸提取效率为0.00147％。因此，桑树中1-脱氧野尻霉素提取效率较低成为1-脱氧野尻霉素制备的瓶颈问题。在有关桑叶1-DNJ提取方法的文献中不也有以传统的煎煮法、回流提取法及超生波辅助提取法等。然而，煎煮法会使1-DNJ结构被破坏，降低其生物利用度；回流法及超声波辅助提取法则有工艺复杂，不利于大规模工业生产等缺点。目前的这些提取方法很难满足人们对1-DNJ的需求。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种响应面法优化的稀酸乙醇提取桑叶中1-脱氧野尻霉素的方法。 

本发明所采取的技术方案是： 

一种酸性乙醇溶液提取桑叶中1-脱氧野尻霉素的方法，包括以下步骤： 

1)取体积浓度为40～70％的乙醇溶液并调节pH值为2～7作为提取溶媒，加入桑叶粗粉，混匀，使液料比为10～30，即10～30mT提取溶媒/g桑叶粗粉，在70～90℃条件下浸提1.5～3h，抽滤，分别得1-DNJ初步提取液和桑叶滤渣； 

2)将桑叶滤渣按步骤1)重复浸提1～4次，将每次所得1-DNJ初步提取液混合； 

3)将混合的1-DNJ初步提取液进行减压浓缩，离心，收集上清液，抽滤，收集滤液； 

4)再将滤液用超纯水稀释至体积为提取溶媒的0.03～0.1倍，再经纯化，减压浓缩，即得桑叶1-DNJ提取液。 

进一步的，一种酸性乙醇溶液提取桑叶中1-脱氧野尻霉素的方法，通过响应面法优化后，包括以下步骤： 

1)取体积浓度为66.5％的乙醇溶液并调节pH值为6.7作为提取溶媒，加入桑叶粗粉，混匀，使液料比为25，即25mL提取溶媒/g桑叶粗粉，在80(条件下浸提2.7h，抽滤，分别得1-DNJ初步提取液和桑叶滤渣； 

2)将桑叶滤渣按步骤1)重复浸提1次，将2次所得1-DNJ初步提取液混合； 

3)将混合的1-DNJ初步提取液进行减压浓缩，离心，收集上清液，抽滤，收集滤液； 

4)再将滤液用超纯水稀释至体积为提取溶媒的0.04倍，再经纯化，减压浓缩，即得桑叶1-DNJ提取液。 

进一步的，上述所有调节pH用到的调节剂选自盐酸、硫酸和醋酸。 

进一步的，上述所有离心为：4500～5500rpm离心13～18min。 

进一步的，上述所有纯化的具体过程为：将溶液用732H型阳离子交换树脂纯化富集，除去中性及酸性成分，去离子水清洗离子交换柱，洗至流出液至无色后，用体积比为7：3的氨水和乙醇混合液开始洗脱，收集洗脱液。 

进一步的，上述在所述的响应面法优化过程中，设置乙醇浓度、pH值、浸提时间3个变量，并利用DesignExpert7.1.6软件根据Box-Behnken设计原则进行优化。 

本发明的有益效果是： 

本文充分考虑了以上因素，优化了桑叶1-DNJ提取工艺参数，非常具有实用价值，也为桑叶降糖成分1-DNJ在医药、保健品等领域的研究开发打下了夯实的基础，提供了可靠的依据，更为糖尿病的治疗研究提供了新思路、新方法。