[发明专利]低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及以人血浆为原料制备静注人免疫球蛋白的方法，更具体的说涉及一种采用低温乙醇法提取静注人免疫球蛋白的方法。

背景技术

低温乙醇法是人血浆蛋白的制备方法之一，该方法是1940年由美国哈佛大学医学院的EdwinJ.Cohn教授发明的，因此又称为“孔氏法”。孔氏法最初用来分离牛血清白蛋白，随后应用于人血浆分离。低温乙醇法是以混合血浆为原料，逐级降低酸度（从pH7.0降到pH4.0）。提高乙醇浓度（从0升到40%），同时降低温度（从2℃降到-2℃），各种蛋白在不同的条件下以组分（粗制品）的形式分步从溶液中析出，并通过离心或者过滤分离出来。影响蛋白质沉淀反应因素主要有五个，即：pH值、温度、蛋白质浓度、离子强度和乙醇浓度。由于工艺参数选择不合理及分离方法不科学，导致了现有的低温乙醇法生产人免疫球蛋白收率较低且纯度低。

专利号为201110030778.3的发明专利公开了“一种生产静注人免疫球蛋白的方法”，该发明的主要工艺如下：以人血浆为原料，首先从血浆中分离出组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，再从组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀分离组分Ⅰ+Ⅲ，再分离组分Ⅱ，再用层析法纯化组分Ⅱ，之后进行病毒灭活，灭活后配制静注人免疫球蛋白。该方法的组分分离周期略长、且纯度较低，人免疫球蛋白生产的收率还有待提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法，在用人血浆为原料制备静注人免疫球蛋白时，以提高静注人免疫球蛋白的收率。

本发明所述低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法，包括以下步骤：

步骤一、从人血浆中分离FⅠ，得FⅠ上清液；

步骤二、从FⅠ上清液中分离出FⅡ+Ⅲ沉淀；

步骤三、从FⅡ+Ⅲ沉淀中分离FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；

步骤四、从FⅢ上清液中分离出FⅡ沉淀；

步骤五、FⅡ沉淀超滤、纯化，包括以下步骤：

①、超滤脱醇：取重量为上述FⅡ沉淀8～10倍、温度为2～8℃注射用水将FⅡ沉淀完全溶解，采用二级澄清除菌过滤，调节溶液pH值至4.30～4.70；

②、巴氏灭活：将超滤脱醇后的溶液用注射用水调节蛋白质含量至17～33g/l，按60～120g/l加入甘氨酸，调节pH值至7.10～7.50，在55～65℃的温度下加温9～11小时进行巴氏灭活后，降温至20～30℃；

③、一次沉淀分离：用注射用水调节巴氏灭活后的溶液，使溶液中蛋白质含量为5.0～15.0g/l，调节溶液pH值至6.70～7.20，控制温度至0～2℃，调节乙醇浓度至体积百分比18～20%，控制温度至2～6℃，调节溶液的电导率为1.20～1.50ms/cm，搅拌反应1～3小时，按每千克蛋白质0.08～0.12kg比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，继续反应0.5～1.5小时后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.9μｍ的深层滤板，控制压滤机温度至5℃以下，过滤分离出一次沉淀，得一次沉淀上清液；

④、二次沉淀分离：将一次沉淀上清液温度控制至-1～-3℃，调节pH值至7.10～7.40，乙醇浓度至体积百分比24～26%，控制溶液温度至-6～-12℃，调节溶液的电导率为1.50-1.90ms/cm，搅拌反应1～3小时，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.9μｍ的深层滤板，控制压滤机温度至-3℃以下，过滤分离出二次沉淀；

⑤、二次沉淀超滤脱醇：取重量为上述二次沉淀5～10倍、温度为2～8℃的注射用水将二次沉淀完全溶解，采用二级澄清除菌过滤，同时调节pH值至3.40～3.80，超滤脱醇后再调节pH值至3.8～4.4。

步骤六、将步骤五所得二次沉淀溶液按成品规格配制，使蛋白质含量不低于50g/l，加入麦芽糖，使麦芽糖含量为90～110g/l，加入聚山梨酯-80，使聚山梨酯-80含量不大于80μg/ml，调节pH值至3.8～4.4，实现制品配制后，进行除菌过滤分装。

所述步骤一是将融合后的人血浆的温度控制在0.0～4.0℃之间，调节蛋白质浓度至40～65g/l，调节溶液的电导率为12.0～14.0ms/cm，调节pH值至6.80～7.30，调节乙醇浓度至体积百分比7.0～10.0%，控制温度至-1.0～-3.0℃，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时选用孔径不超过0.9μｍ的深层滤板，控制压滤机温度至-1℃以下，过滤分离出FⅠ沉淀，得FⅠ上清液。