[发明专利]一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种远缘杂交育种和杂交种繁殖方法。

背景技术

春兰(Cym.goeringii)，又称草兰、山兰、朵朵香。是兰科，兰属，地生兰类多年生草本。是中国兰的代表种，原产于我国长江流域或西南地区，日本和朝鲜半岛也有分布。春兰名优品种具有很高的观赏价值和经济价值，在东南亚特别是日本、韩国和台湾地区，春兰十分受欢迎。春兰传统的品种选育以绿色为基本，崇尚瓣型和素心，是贯彻执行瓣型理论最具代表的国兰种，因此流传至今的名优春兰品种，绝大部分为绿色瓣型花或素心花品种。

大花蕙兰（Cymbidium hybridium），又叫喜姆比兰和蝉兰。兰科、兰属植物。它是由兰属中的大花附生种、小花垂生种以及一些地生兰经过一百多年的多代人工杂交育成的品种群。大花蕙兰叶长碧绿，花姿粗旷，花色艳丽，是世界著名的“兰花新星”。在国际花卉市场十分畅销，深受花卉爱好者的倾爱。大花蕙兰的生产地主要是日本，韩国和中国，澳洲及美国等。

鉴于人们对新产品和新兰花的追求，培育更多品种的兰花种是植物界的研究的一个课题。

发明内容

本发明目的是为人们提供一种以春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法。

本发明以春兰为母本，大花蕙兰为父本，母本在开花2天后去雄，父本取开花后3～5天的花粉，通过人工授粉获得杂交种，在杂交种的蒴果未开裂前采收，经表面消毒和种子用营养液前处理后进行无菌播种，经暗培养种子萌发、种子直接成苗或原球茎增殖，原球茎再经芽诱导、根诱导、组培苗炼苗，然后进行温室栽培。

本发明针对春兰与大花蕙兰种间杂交育种和种子无菌播种中，如何提高优良品种授粉结实率，种子萌发率、原球茎增殖率、诱芽诱根成苗率和炼苗成活率等，提出一种使杂交成苗快，品质好，高效、简便、推广性强的春兰和大花蕙兰杂交和无菌播种育苗方法。

具体方法：

无菌播种是：将未开裂的蒴果表面用质量分数为75%的酒精消毒后，以质量分数为0.1%的HgCl水溶液浸泡10分钟后取出，再浸入质量分数为95%的酒精内，取出蒴果立即在酒精灯上点燃，待蒴果表面酒精燃烧完后，切开蒴果，取出种子，放入装有营养液的玻璃试剂瓶内，振荡10～20分钟后，将种子用无菌不锈钢小勺均匀分散于培养基表面。

种子前处理营养液中含有1/2MS、萘乙酸（NAA）0.5mg/l、蔗糖20g/l和蛋白胨0.5g/l，营养液的pH值为5.25～5.3；所述无菌播种培养基中含有1/2MS、萘乙酸（NAA）0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l 和琼脂6g/l，培养基的pH值为5.25～5.3。

暗培养种子萌发是：将连同培养基的种子置于无光、培养温度为23±0.2℃的环境温度下放置。

原球茎增殖是：待原球茎萌发至长度为2～5mm时，原球茎材料每隔60天转入一次增殖培养基，转入增殖培养基后将玻璃瓶置于温度为23±0.2℃的环境中，并且光照8小时/天，光照强度为1500lux±100 lux；所述增殖培养基中含有1/2MS、2,4-D2mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l 和琼脂6g/l，所述增殖培养基的pH值为5.25～5.3。

种子直接成苗是：待原球茎萌发的幼芽长度为2～5mm时，向玻璃瓶内转入二次培养基；所述二次培养基中含1/2MS、萘乙酸（NAA）0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l 和琼脂6g/l，二次培养基的pH值为5.25～5.3。

茎诱芽是：待原球茎萌发的幼芽长度为1～2cm时，转入诱芽培养基，置于23±0.2℃的环境中2～3个月，期间光照12小时/天，光照强度为2000lux±100 lux；所述诱芽培养基中含1/2MS、萘乙酸（NAA）0.1mg/l、6-BA1mg/l 、蔗糖20g/l、蛋白胨0.5g/l 和琼脂6g/l，所述诱芽培养基的pH值为5.25～5.3。

根诱导是：待原球茎萌发的幼芽长度为2～3cm时，向玻璃瓶内转入生根壮苗培养，置于23±0.2℃的环境中，并且光照10小时/天，光照强度1500lux±100 lux；所述生根壮苗培养基中含1/2MS、萘乙酸（NAA）0.5mg/l、6-BA0.5mg/l 、蔗糖20g/l、蛋白胨0.5g/l 、活性碳0.5g/l 和琼脂6g/l，所述生根壮苗培养基的pH值为5.25～5.3。