[发明专利]一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表达量检测的方法在审
| 申请号： | 201410000114.6 | 申请日： | 2014-01-02 |
| 公开（公告）号： | CN103937807A | 公开（公告）日： | 2014-07-23 |
| 发明（设计）人： | 陈伟兴;黄金善;管雪婷;苗晓微 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/15 | 分类号： | C12N15/15;C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150030 黑龙江省哈尔滨市香*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白酶 抑制 蛋白 基因 克隆 及其 表达 检测 方法 | ||
1.一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)设计多组引物，分别为：
CAST1-F：5’-TCAACACCTGCATCTTCTGC-3’；
CAST1-R：5’-TTGAGCTGGAGACACAAACG-3’；
CAST2-F：5’-CGGATACAGAAAGGAAGACCTG-3’；
CAST2-R：5’-AGTATGTCCATCGCATCATCTG-3’；
CAST3-F：5’-GAACACAGATGATGCGATGG-3’；
CAST3-R：5’-TGATCTGGTGGAAGGGAGTC-3’；
CAST3R1：5’-GTTTGTCCTGCCTCTAAGTCT-3’；
CAST3R2：5’-TTCAGTCTGCCGTCTCTGGCCCCC-3’；
CAST5R1：5’-GGTTGTGATGATGGTAAAGTGC-3’；
CAST5R2：5’-CCTTATCTTTCAGAGGGTCCGT-3’；
所述CAST1-F、CAST1-R、CAST2-F、CAST2-R、CAST3-F和CAST3-R为克隆CAST基因部分编码序列用引物，所述CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2为克隆CAST基因5’、3’UTR用引物；
(2)以目标生物的RNA为模板，在RT-PCR过程中加入步骤(1)设计的引物进行反转录PCR、电泳，确定CAST基因部分编码序列、CAST基因5’UTR序列以及CAST基因3’UTR序列，并确定目标生物CAST基因完整序列。
2.一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因表达量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
根据权利要求1所确定的CAST基因完整序列，设计引物：
CASTY-F：5’-CATCTGTTTGTCCTGCCTCTAAG-3’；
CASTY-R：5’-GATGAGGAACCTTCTGACAACTG-3’；其中，所述CASTY-F以及CASTY-R为CAST基因表达定量用引物；以目标生物的RNA为模板，在RT-PCR过程中加入引物CASTY-F、引物CASTY-R进行反转录PCR、电泳，确定目标生物各组织中鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因基因表达情况。
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