[发明专利]用于生物合成生产的重组宿主细胞

权利要求书

1.一种酵母细胞，该细胞包括编码多酶复合体的异源多核苷酸，该多酶复合体参与苯丙烷类代谢途径和香草素或其羟基苯甲醛前体的生物合成，该多酶复合体包括用于香豆酸的生物合成的酶，其中该多酶复合体进一步包括：a)巴豆酸酶，该巴豆酸酶是烯酰-辅酶A水合酶（ECH）；b)辅酶A连接酶，该辅酶A连接酶是4-香豆酸-辅酶A连接酶（4CL）；c) 3-单加氧酶，该3-单加氧酶是羟基苯甲酸羟化酶（HBH）或酚羟化酶（PheA）和黄素还原酶（FLARED）；和d)甲基转移酶，该甲基转移酶是O-甲基转移酶。

2.根据权利要求1所述的酵母细胞，该多酶复合体包括

a) 苯丙氨酸氨解酶（PAL）、肉桂酸羟化酶（C4H）、细胞色素P450还原酶（CPR）、辅酶A连接酶、巴豆酸酶、3-单加氧酶和甲基转移酶；

b) 酪氨酸氨解酶（TAL）、辅酶A连接酶、巴豆酸酶、3-单加氧酶和甲基转移酶；或者

c) 苯丙氨酸/酪氨酸氨解酶（PAL/TAL）、肉桂酸羟化酶（C4H）、细胞色素P450还原酶（CPR）、辅酶A连接酶、巴豆酸酶、3-单加氧酶和甲基转移酶。

3.根据权利要求1所述的酵母细胞，其中该多酶复合体包括

d) 甲基转移酶，所述甲基转移酶是咖啡酸O-甲基转移酶（COMT）。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中该巴豆酸酶是以下项中的任一项的烯酰-辅酶A水合酶（ECH）

a) 负责p-香豆酰辅酶A和/或阿魏酰辅酶A的链还原反应的ECH；

b) 将p-香豆酰辅酶A转化为4-羟基苯甲醛的ECH；或者

c) 将阿魏酰辅酶A转化为香草醛的ECH。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，该细胞进一步包括

a) 编码羧基还原酶（CAR）的异源多核苷酸，任选地连同编码磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶（PPTase）的多核苷酸；和/或

b) 编码醇氧化酶的异源多核苷酸。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中该细胞是DNA修复缺陷型细胞或包括在DNA修复缺陷型细胞中拼接的多核苷酸簇的生产细胞。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中编码一系列酶的多核苷酸由单个多顺反子操纵子表达，或其中编码一系列酶的多核苷酸由分离的启动子表达。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中这些多核苷酸被稳定地整合至该细胞基因组中。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中这些多核苷酸源自至少两种不同的物种。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的酵母细胞，其中这些酶中的至少一个是嵌合酶。

11.根据权利要求10所述的酵母细胞，其中该嵌合酶是由不同多核苷酸的片段构成的核苷酸序列编码的，这些片段被拼接成嵌合核苷酸序列。

12.根据权利要求1至3和11中任一项所述的酵母细胞，其中该香草素选自下组，该组由以下各项组成：香草醛、香草酸、乙基-香草醛、香草醇和香草醛-糖苷。

13.根据权利要求1至3和11中任一项所述的酵母细胞，其中该羟基苯甲醛前体选自下组，该组由以下各项组成：原儿茶醛、原儿茶酸、原儿茶醇、4-羟基苯甲醛、4-羟基苯甲酸、4-羟基苄醇、肉桂酸、香豆酸、咖啡酸和阿魏酸。

14.根据权利要求5所述的酵母细胞，其中所述醇氧化酶为香草醇氧化酶。