[发明专利]经由与碳储存有关的CoA依赖性碳链延长生成6碳化学品的方法

权利要求书

1.一种用于生物合成一种或多种选自己二酸、6-氨基己酸、6-羟基己酸、己亚甲基二胺、己内酰胺、和1,6-己二醇的产物的方法，所述方法包括经由两个循环的CoA依赖性碳链延长从乙酰基-CoA酶促合成6碳链脂肪族主链，并且在一个或多个步骤中在所述主链中酶促形成两个选自羧基、胺、和羟基基团的末端官能团以直接生成所述产物或在随后的步骤中生成所述产物。

2.权利要求1的方法，其中所述6碳链脂肪族主链是己酰基-CoA。

3.权利要求1或2的方法，其中所述两个循环的CoA依赖性碳链延长包括使用β-酮硫解酶或乙酰基-CoA羧化酶和乙酰乙酰基-CoA合酶、3-羟酰基-CoA脱氢酶或3-氧化酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶、和反式-2-烯酰基-CoA还原酶以从乙酰基-CoA形成己酰基-CoA。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述两个末端官能团是相同的。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述两个末端官能团是不同的。

6.权利要求5的方法，其中所述产物包含末端胺和末端羧基基团。

7.权利要求5的方法，其中所述产物包含末端羟基基团和末端羧基基团。

8.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述两个末端官能团是胺。

9.权利要求8的方法，其中ω-转氨酶或脱乙酰酶酶促形成所述两个胺基团。

10.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述两个末端官能团是羟基基团。

11.权利要求7或权利要求10的方法，其中单加氧酶、氧化还原酶和铁氧还蛋白或(ii)醇脱氢酶酶促形成所述两个羟基基团。

12.权利要求11的方法，其中所述单加氧酶与SEQIDNO:13-15中所列的任一种氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

13.权利要求1-7中任一项的方法，其中硫酯酶、醛脱氢酶、7-氧代庚酸脱氢酶、或6-氧代己酸脱氢酶酶促形成末端羧基基团。

14.权利要求13的方法，其中所述硫酯酶与SEQIDNO:1中所列的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

15.权利要求6、8、或9的方法，其中ω-转氨酶酶促形成所述胺基团。

16.权利要求15的方法，其中所述ω-转氨酶与SEQIDNO.7-12中所列的任一种氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

17.权利要求1-7中任一项的方法，其中羧酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶在形成所述产物中形成末端醛基团作为中间体。

18.权利要求17的方法，其中所述羧酸还原酶与SEQIDNO.2-6中所列的任一种氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

19.前述权利要求中任一项的方法，其中在重组宿主中实施所述方法。

20.权利要求19的方法，其中对所述宿主进行需氧、厌氧或微需氧培养条件下的培养策略。

21.权利要求19或权利要求20的方法，其中在营养物限制的条件下培养所述宿主。

22.根据权利要求19-21中任一项的方法，其中使用陶瓷中空纤维膜保留所述宿主以维持发酵期间的高细胞密度。

23.根据权利要求19-22中任一项的方法，其中对所述发酵补料的主要碳源源自生物或非生物给料。

24.权利要求23的方法，其中所述生物给料是或者源自单糖、二糖、木质纤维素、半纤维素、纤维素、木质素、乙酰丙酸、甲酸、甘油三酯、甘油、脂肪酸、农业废物、浓缩酒糟或城市废物。

25.权利要求23的方法，其中所述非生物给料是或者源自天然气、合成气、CO₂/H₂、甲醇、乙醇、来自环己烷氧化过程的非挥发性残留物(NVR)或碱洗废物流、或对苯二甲酸/异酞酸混合物废物流。

26.权利要求19-25中任一项的方法，其中所述宿主是原核生物。