[发明专利]高温死端抗体过滤

说明书

技术领域

本发明涉及浓缩的含有蛋白的溶液，具体涉及浓缩的含有抗体的溶液，尤其是这些浓缩的含有抗体的溶液的过滤。

背景技术

多种含有可注射蛋白的溶液尤其是含有抗体的溶液供应到市场上。用那些溶液进行皮下注射，导致了由于注射体积的限制而产生的对溶液中高浓度蛋白的需求。

尤其对于高度浓缩的蛋白溶液而言，因为溶液粘度高，通过将溶液泵过过滤器诸如0.22 μ的过滤器进行除菌/微生物过滤可能非常繁琐或是不可能的，并且可导致非常低的产率和极低的过滤能力。其还经常导致滤液中蛋白含量的降低以及低过滤能力。结果是可能需要使用高压来保持流动。这种高压向蛋白施加应激并可导致更高的杂质率。

 大多数蛋白在高温下不稳定，并因此在高于+30 ℃的升高的温度下可能变性和失去活性。这限制了在过滤时使用升高高度浓缩蛋白溶液的温度来降低粘度。然而，出乎意料地，抗体似乎在较高的温度下（高达50-70 ℃）非常稳定，使得在较高的温度下过滤抗体可行。

发明概述

本发明提供一种高度浓缩的抗体和/或片段溶液过滤的方法。本发明还提供一种包含浓度高于100 g/L的抗体或/和其片段的高度浓缩的溶液过滤的方法，其中所述溶液在过滤过程中被加热到高于30 ℃的温度。

本发明还提供一种高度浓缩的抗体溶液过滤的方法，其中所述抗体或其片段以高于200 g/L的浓度存在，其中所述溶液在过滤过程中被加热到高于30 ℃的温度。本发明还提供了一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中增加过滤产率的方法。本发明还提供一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中保持过滤器流速恒定的方法。此外，本发明提供一种在高度浓缩的抗体溶液过滤的过程中增加过滤器流速的方法。

具体实施方式

如上文解释的，在室温过滤高度浓缩的蛋白溶液很慢，可能导致蛋白的低回收或产率，并且还可能显示滤液中蛋白含量的降低，同时显示低的过滤能力。一种传统的解决方法是在过滤过程中施加高压以保持流动。这种使用高压向蛋白施加了应激，可导致蛋白变性并增加其他产物相关的杂质。

令人惊讶地发现抗体在较高的温度（高于30 ℃）下比预期的更稳定，因此可适当地在比预期更高的温度下进行高度浓缩的抗体溶液的过滤。这种在升高的温度下过滤高度浓缩的抗体溶液显著提高了过滤速度和过滤能力而没有蛋白变性。此外，提高了蛋白回收或产率，维持了滤液中的蛋白含量。

如所证明的，刚好位于过滤器之前以加热泵过过滤器的溶液的内置（inline）换热器显著减少了过滤时间并增加了过滤的产率，或者可用其他方式进行溶液加热，即通过将过滤器置于适当温度下的烤箱/水浴中。

如本文所用的术语“蛋白”、“多肽”和“肽”指由通过肽键连接的至少5个组分氨基酸组成的化合物。该组分氨基酸可以来自由遗传密码编码的氨基酸组，它们也可以为不是由遗传密码编码的天然氨基酸，以及合成氨基酸。不是由遗传密码编码的天然氨基酸是例如，羟脯氨酸，y-羧基谷氨酸（y-carboxylglutamate），鸟氨酸，磷酸丝氨酸，D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过化学合成制备的氨基酸，即遗传密码编码的氨基酸的D--异构体，诸如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib (a-氨基异丁酸)，Abu (α-氨基丁酸)，Tle (叔丁基甘氨酸)，β-丙氨酸，3-氨基甲基苯甲酸和邻氨基苯甲酸。

术语“抗体”涵盖了单克隆抗体（包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体），具有多表位特异性的抗体组合物，双特异性抗体，双体，和单链分子，以及抗体片段（例如，Fab, F(ab’)₂, 和 Fv）。